基因组学与应用生物学
基因組學與應用生物學
기인조학여응용생물학
GENOMICS AND APPLIED BIOLOGY
2012年
2期
109-116
,共8页
庞耀珊%谢芝勋%谢丽基%邓显文%谢志勤%刘加波%谢体三
龐耀珊%謝芝勛%謝麗基%鄧顯文%謝誌勤%劉加波%謝體三
방요산%사지훈%사려기%산현문%사지근%류가파%사체삼
禽流感病毒(AIV)%H5N1亚型%抗原表位%表达
禽流感病毒(AIV)%H5N1亞型%抗原錶位%錶達
금류감병독(AIV)%H5N1아형%항원표위%표체
血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白是禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的一个重要表面抗原性蛋白,在疾病诊断和防治上有重要意义.本研究为了探讨一种更为简便有效的HA重组蛋白表达途径,利用生物信息学软件,对H5N1亚型AIV HA 基因编码的氨基酸序列进行分析,在分析其在大肠杆菌中的密码子偏好性、稀有密码子分布情况及有关蛋白的抗原性等重要特性后,构建了HA抗原表位重组表达质粒pET-32a(+)-HA.经测试,该重组质粒在1 mmol/L IPTG诱导剂作用下诱导过夜,能在大肠杆菌Rosetta-gami B (DE3)中高效表达,并得到48.1 kD大小的目的重组表达蛋白.重组蛋白用6×His-tagged protein纯化试剂盒纯化后,与福氏佐剂等量混合制备成抗原,以200 μg/鸡的剂量皮下注射2月龄SPF鸡3次,采血分离血清.Western-Blot试验结果表明,该重组表达蛋白能分别与所制备的高免鸡血清及H5N1亚型AIV阳性血清发生特异性反应,在硝酸纤维素膜上出现特异性杂交带.说明本试验研究的HA抗原重组表达蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,保留了HA蛋白的抗原活性,提示该重组蛋白在H5亚型AIV的防治技术研究中具有重要的实际应用价值.
血凝素(hemagglutinin,HA)蛋白是禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的一箇重要錶麵抗原性蛋白,在疾病診斷和防治上有重要意義.本研究為瞭探討一種更為簡便有效的HA重組蛋白錶達途徑,利用生物信息學軟件,對H5N1亞型AIV HA 基因編碼的氨基痠序列進行分析,在分析其在大腸桿菌中的密碼子偏好性、稀有密碼子分佈情況及有關蛋白的抗原性等重要特性後,構建瞭HA抗原錶位重組錶達質粒pET-32a(+)-HA.經測試,該重組質粒在1 mmol/L IPTG誘導劑作用下誘導過夜,能在大腸桿菌Rosetta-gami B (DE3)中高效錶達,併得到48.1 kD大小的目的重組錶達蛋白.重組蛋白用6×His-tagged protein純化試劑盒純化後,與福氏佐劑等量混閤製備成抗原,以200 μg/鷄的劑量皮下註射2月齡SPF鷄3次,採血分離血清.Western-Blot試驗結果錶明,該重組錶達蛋白能分彆與所製備的高免鷄血清及H5N1亞型AIV暘性血清髮生特異性反應,在硝痠纖維素膜上齣現特異性雜交帶.說明本試驗研究的HA抗原重組錶達蛋白具有良好的免疫原性和反應原性,保留瞭HA蛋白的抗原活性,提示該重組蛋白在H5亞型AIV的防治技術研究中具有重要的實際應用價值.
혈응소(hemagglutinin,HA)단백시금류감병독(avian influenza virus,AIV)적일개중요표면항원성단백,재질병진단화방치상유중요의의.본연구위료탐토일충경위간편유효적HA중조단백표체도경,이용생물신식학연건,대H5N1아형AIV HA 기인편마적안기산서렬진행분석,재분석기재대장간균중적밀마자편호성、희유밀마자분포정황급유관단백적항원성등중요특성후,구건료HA항원표위중조표체질립pET-32a(+)-HA.경측시,해중조질립재1 mmol/L IPTG유도제작용하유도과야,능재대장간균Rosetta-gami B (DE3)중고효표체,병득도48.1 kD대소적목적중조표체단백.중조단백용6×His-tagged protein순화시제합순화후,여복씨좌제등량혼합제비성항원,이200 μg/계적제량피하주사2월령SPF계3차,채혈분리혈청.Western-Blot시험결과표명,해중조표체단백능분별여소제비적고면계혈청급H5N1아형AIV양성혈청발생특이성반응,재초산섬유소막상출현특이성잡교대.설명본시험연구적HA항원중조표체단백구유량호적면역원성화반응원성,보류료HA단백적항원활성,제시해중조단백재H5아형AIV적방치기술연구중구유중요적실제응용개치.
