军医进修学院学报
軍醫進脩學院學報
군의진수학원학보
ACADEMIC JOURNAL OF PLA POSTGRADUATE MEDICAL SCHOOL
2012年
5期
506-508,521
,共4页
陈倩倩%万军%阎丽%王卫华%王昌正%石卉%苏斌斌%曾庆环%杜海涛
陳倩倩%萬軍%閻麗%王衛華%王昌正%石卉%囌斌斌%曾慶環%杜海濤
진천천%만군%염려%왕위화%왕창정%석훼%소빈빈%증경배%두해도
骨髓间充质干细胞%干细胞培养%方法比较%绿色荧光蛋白%示踪
骨髓間充質榦細胞%榦細胞培養%方法比較%綠色熒光蛋白%示蹤
골수간충질간세포%간세포배양%방법비교%록색형광단백%시종
目的 观察并比较两种小鼠骨髓间充质干细胞分离培养方法及选取GFP-BMSCs作为移植实验示踪的种子细胞可行性.方法 通过骨片培养法(A法)和全骨髓贴壁法(B法)培养扩增小鼠骨髓间充质干细胞,并参照不同的培养方法优化其换液方式；观察两种培养方法原代及传代GFP小鼠骨髓MSCs形态变化；取第3代细胞进行生长曲线测定及多向分化功能检测；观察GFP小鼠骨髓MSC经多次传代及诱导分化后绿色荧光的稳定性.结果 1)A法原代培养可见贴壁细胞增殖形成大小不等的克隆集落,并向周围进一步扩展、融合,而B法在原代培养时由于混杂较多血液系统细胞,传代至3、4代即可获得较纯的BMSCs；2)观察其生长曲线,A法细胞扩增速度快,纯度高,B法细胞由于受杂细胞的影响,扩增难度大；3)BMSCs可被诱导成脂肪细胞,油红O染色可见红色脂肪颗粒；在成骨分化过程中可见骨结节结构形成；4)GFP-BMSCs传代后生物学特性稳定,传代至5代及诱导分化后其GFP表达仍为强阳性.结论 与传统全骨髓贴壁法相比,骨片培养法可在原代或1代就获得高浓度的足量干细胞,GFP-BMSCs经多次传代后荧光不减退,可作为体内细胞示踪.
目的 觀察併比較兩種小鼠骨髓間充質榦細胞分離培養方法及選取GFP-BMSCs作為移植實驗示蹤的種子細胞可行性.方法 通過骨片培養法(A法)和全骨髓貼壁法(B法)培養擴增小鼠骨髓間充質榦細胞,併參照不同的培養方法優化其換液方式；觀察兩種培養方法原代及傳代GFP小鼠骨髓MSCs形態變化；取第3代細胞進行生長麯線測定及多嚮分化功能檢測；觀察GFP小鼠骨髓MSC經多次傳代及誘導分化後綠色熒光的穩定性.結果 1)A法原代培養可見貼壁細胞增殖形成大小不等的剋隆集落,併嚮週圍進一步擴展、融閤,而B法在原代培養時由于混雜較多血液繫統細胞,傳代至3、4代即可穫得較純的BMSCs；2)觀察其生長麯線,A法細胞擴增速度快,純度高,B法細胞由于受雜細胞的影響,擴增難度大；3)BMSCs可被誘導成脂肪細胞,油紅O染色可見紅色脂肪顆粒；在成骨分化過程中可見骨結節結構形成；4)GFP-BMSCs傳代後生物學特性穩定,傳代至5代及誘導分化後其GFP錶達仍為彊暘性.結論 與傳統全骨髓貼壁法相比,骨片培養法可在原代或1代就穫得高濃度的足量榦細胞,GFP-BMSCs經多次傳代後熒光不減退,可作為體內細胞示蹤.
목적 관찰병비교량충소서골수간충질간세포분리배양방법급선취GFP-BMSCs작위이식실험시종적충자세포가행성.방법 통과골편배양법(A법)화전골수첩벽법(B법)배양확증소서골수간충질간세포,병삼조불동적배양방법우화기환액방식；관찰량충배양방법원대급전대GFP소서골수MSCs형태변화；취제3대세포진행생장곡선측정급다향분화공능검측；관찰GFP소서골수MSC경다차전대급유도분화후록색형광적은정성.결과 1)A법원대배양가견첩벽세포증식형성대소불등적극륭집락,병향주위진일보확전、융합,이B법재원대배양시유우혼잡교다혈액계통세포,전대지3、4대즉가획득교순적BMSCs；2)관찰기생장곡선,A법세포확증속도쾌,순도고,B법세포유우수잡세포적영향,확증난도대；3)BMSCs가피유도성지방세포,유홍O염색가견홍색지방과립；재성골분화과정중가견골결절결구형성；4)GFP-BMSCs전대후생물학특성은정,전대지5대급유도분화후기GFP표체잉위강양성.결론 여전통전골수첩벽법상비,골편배양법가재원대혹1대취획득고농도적족량간세포,GFP-BMSCs경다차전대후형광불감퇴,가작위체내세포시종.
