CAJ | 학술논문

无乳链球菌是引起奶牛乳房炎的常见病原微生物之一,其表面蛋白作为一种高免疫原性的生物大分子,具有较高的种内特异性,是理想的候选疫苗与免疫检测靶标.本研究通过对无乳链球菌高免疫原性表面蛋白Rib的重组表达与抗体制备,为后期无乳链球菌的疫苗研制与检测奠定了良好的基础.首先提取了无乳链球菌基因组DNA,从中成功扩增出长度为452 bp的编码表面蛋白Rib N端的基因片段.将这一片段连入重组表达载体pET-26b,转化受体菌株BL21 (DE3)后利用IPTG进行诱导,结果表达了分子质量约为18 ku的外源蛋白.在低温表达条件卞,对IPTG诱导浓度进行优化,结果表明,IPTG的最适诱导浓度为0.05 mmol/L.将诱导后的菌体进行超声波破碎并进行SDS-PAGE检测,结果显示重组蛋白以包涵体形式存在,对其进行变性、复性处理,利用亲和凝胶纯化后获得了纯度较高的重组蛋白.将重组蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,经检测抗体效价达到1∶480 000.
무유련구균시인기내우유방염적상견병원미생물지일,기표면단백작위일충고면역원성적생물대분자,구유교고적충내특이성,시이상적후선역묘여면역검측파표.본연구통과대무유련구균고면역원성표면단백Rib적중조표체여항체제비,위후기무유련구균적역묘연제여검측전정료량호적기출.수선제취료무유련구균기인조DNA,종중성공확증출장도위452 bp적편마표면단백Rib N단적기인편단.장저일편단련입중조표체재체pET-26b,전화수체균주BL21 (DE3)후이용IPTG진행유도,결과표체료분자질량약위18 ku적외원단백.재저온표체조건변,대IPTG유도농도진행우화,결과표명,IPTG적최괄유도농도위0.05 mmol/L.장유도후적균체진행초성파파쇄병진행SDS-PAGE검측,결과현시중조단백이포함체형식존재,대기진행변성、복성처리,이용친화응효순화후획득료순도교고적중조단백.장중조단백면역신서란토제비다극륭항체,경검측항체효개체도1∶480 000.