检验医学
檢驗醫學
검험의학
LABORATORY MEDICINE
2011年
5期
330-333
,共4页
陈佳%陆慧琦%宋杰%吴海洋%曹玉华%韩焕兴
陳佳%陸慧琦%宋傑%吳海洋%曹玉華%韓煥興
진가%륙혜기%송걸%오해양%조옥화%한환흥
聚苯乙烯肽亲和标签%葡萄球菌蛋白A%免疫球蛋白Fc区%酶联免疫吸附试验
聚苯乙烯肽親和標籤%葡萄毬菌蛋白A%免疫毬蛋白Fc區%酶聯免疫吸附試驗
취분을희태친화표첨%포도구균단백A%면역구단백Fc구%매련면역흡부시험
目的 应用生物工程技术克隆、表达聚苯乙烯肽(PS)亲和标签(PStag)和葡萄球菌蛋白A(SPA)免疫球蛋白(IgG)-Fc结合区(ZZ)融合蛋白,在大肠埃希菌BL21中进行高效表达并初步纯化,为优化、提升免疫检测方法奠定基础.方法 应用基因合成技术串联SPA-ZZ结构域和PStag基因,构建重组表达质粒pPS-SPA,经酶切和测序确认,将阳性重组质粒转化BL21感受态细菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和免疫转印试验(Western blot)鉴定表达和纯化产物;直接酶联免疫吸附试验(ELISA)验证融合表达产物对亲水ELISA板的表面吸附特性和定向结合兔、鼠IgG-Fc区的效果.结果 在合成基因的基础上构建的表达载体经序列分析与限制性酶切证实了串联基因的正确克隆,PAGE结果表明可诱导高表达PStag-SPA,纯化产物对亲水ELISA板的吸附能力较高,表达产物对兔与鼠IgG具有定向吸附能力.结论 重组表达的PStag-SPA具有对ELISA板的黏着能力和定向结合兔、鼠IgG-Fc的应用潜力,为优化酶免疫检测技术提供了技术支持.
目的 應用生物工程技術剋隆、錶達聚苯乙烯肽(PS)親和標籤(PStag)和葡萄毬菌蛋白A(SPA)免疫毬蛋白(IgG)-Fc結閤區(ZZ)融閤蛋白,在大腸埃希菌BL21中進行高效錶達併初步純化,為優化、提升免疫檢測方法奠定基礎.方法 應用基因閤成技術串聯SPA-ZZ結構域和PStag基因,構建重組錶達質粒pPS-SPA,經酶切和測序確認,將暘性重組質粒轉化BL21感受態細菌,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和免疫轉印試驗(Western blot)鑒定錶達和純化產物;直接酶聯免疫吸附試驗(ELISA)驗證融閤錶達產物對親水ELISA闆的錶麵吸附特性和定嚮結閤兔、鼠IgG-Fc區的效果.結果 在閤成基因的基礎上構建的錶達載體經序列分析與限製性酶切證實瞭串聯基因的正確剋隆,PAGE結果錶明可誘導高錶達PStag-SPA,純化產物對親水ELISA闆的吸附能力較高,錶達產物對兔與鼠IgG具有定嚮吸附能力.結論 重組錶達的PStag-SPA具有對ELISA闆的黏著能力和定嚮結閤兔、鼠IgG-Fc的應用潛力,為優化酶免疫檢測技術提供瞭技術支持.
목적 응용생물공정기술극륭、표체취분을희태(PS)친화표첨(PStag)화포도구균단백A(SPA)면역구단백(IgG)-Fc결합구(ZZ)융합단백,재대장애희균BL21중진행고효표체병초보순화,위우화、제승면역검측방법전정기출.방법 응용기인합성기술천련SPA-ZZ결구역화PStag기인,구건중조표체질립pPS-SPA,경매절화측서학인,장양성중조질립전화BL21감수태세균,이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체,십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)화면역전인시험(Western blot)감정표체화순화산물;직접매련면역흡부시험(ELISA)험증융합표체산물대친수ELISA판적표면흡부특성화정향결합토、서IgG-Fc구적효과.결과 재합성기인적기출상구건적표체재체경서렬분석여한제성매절증실료천련기인적정학극륭,PAGE결과표명가유도고표체PStag-SPA,순화산물대친수ELISA판적흡부능력교고,표체산물대토여서IgG구유정향흡부능력.결론 중조표체적PStag-SPA구유대ELISA판적점착능력화정향결합토、서IgG-Fc적응용잠력,위우화매면역검측기술제공료기술지지.
