畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2011年
4期
551-556
,共6页
陈国华%贾怀杰%曾爽%房永祥%李小庆%景志忠%才学鹏
陳國華%賈懷傑%曾爽%房永祥%李小慶%景誌忠%纔學鵬
진국화%가부걸%증상%방영상%리소경%경지충%재학붕
猪IL-2基因%毕赤酵母%活性分析
豬IL-2基因%畢赤酵母%活性分析
저IL-2기인%필적효모%활성분석
本研究根据密码子偏爱原则设计猪IL-2引物,克隆其基因后构建pPIC9k-IL-2重组表达载体,线性化后电转化毕赤酵母GS115,获得优化密码子的重组酵母转化子;再用G418抗性梯度法筛选得到多拷贝重组菌株,不同条件下进行甲醇诱导表达.结果表明:经PCR鉴定IL-2基冈已整合到酵母基因组中.表达产物经SDS-PAGE电泳分析发现相对分子质量为16、20 ku两条目的蛋白表达带,脱糖基化分析表明目的蛋白得到了适度的糖基化修饰,Western blotting分析显示表达的蛋白具有良好的免疫反应性,分子筛纯化可以获得纯度为95%的蛋白质,淋巴细胞增殖活性分析表明所得的蛋白质具有促淋巴细胞增殖的活性.毕赤酵母表达系统可以高效地表达具有生物活性的重组猪IL-2蛋白分子.
本研究根據密碼子偏愛原則設計豬IL-2引物,剋隆其基因後構建pPIC9k-IL-2重組錶達載體,線性化後電轉化畢赤酵母GS115,穫得優化密碼子的重組酵母轉化子;再用G418抗性梯度法篩選得到多拷貝重組菌株,不同條件下進行甲醇誘導錶達.結果錶明:經PCR鑒定IL-2基岡已整閤到酵母基因組中.錶達產物經SDS-PAGE電泳分析髮現相對分子質量為16、20 ku兩條目的蛋白錶達帶,脫糖基化分析錶明目的蛋白得到瞭適度的糖基化脩飾,Western blotting分析顯示錶達的蛋白具有良好的免疫反應性,分子篩純化可以穫得純度為95%的蛋白質,淋巴細胞增殖活性分析錶明所得的蛋白質具有促淋巴細胞增殖的活性.畢赤酵母錶達繫統可以高效地錶達具有生物活性的重組豬IL-2蛋白分子.
본연구근거밀마자편애원칙설계저IL-2인물,극륭기기인후구건pPIC9k-IL-2중조표체재체,선성화후전전화필적효모GS115,획득우화밀마자적중조효모전화자;재용G418항성제도법사선득도다고패중조균주,불동조건하진행갑순유도표체.결과표명:경PCR감정IL-2기강이정합도효모기인조중.표체산물경SDS-PAGE전영분석발현상대분자질량위16、20 ku량조목적단백표체대,탈당기화분석표명목적단백득도료괄도적당기화수식,Western blotting분석현시표체적단백구유량호적면역반응성,분자사순화가이획득순도위95%적단백질,림파세포증식활성분석표명소득적단백질구유촉림파세포증식적활성.필적효모표체계통가이고효지표체구유생물활성적중조저IL-2단백분자.
