CAJ | 학술논문

目的建立基于等位基因特异引物延伸的高分辨率熔解曲线法(allele-specific-extension high resolution melting curve analysis,ASE-HRM).方法 ASE-HRM法是在普通高分辨率熔解曲线法(high resolution melting curve analysis,HRM)的PCR反应体系中加入一条等位基因特异性延伸引物(allele-specific-extension,ASE),该引物末端终止于单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,匹配一种等位基因.增加热循环次数,使等位基因特异性引物得以延伸.选取rs1 869 458位点,用ASE-HRM法和直接测序法对194个人源基因组DNA样品进行基因分型.结果通过分析熔解曲线扩增峰,可区分杂合型和纯合型SNP;通过分析有无引物延伸峰,可区分2种纯合型;同时证明长度为11到13个碱基的ASE引物能得到较好的分型结果;使用锁定核酸(locked nucleic acid,LNA)修饰扩增引物可增加扩增产物和延伸产物的解链温度(melting temperature,Tm)差距,简化基因分型.2种方法对所选DNA样品基因分型所得结果完全吻合.结论 ASE-HRM是一种简单、廉价、闭管并能用于检测所有类型SNP的基因分型法.
목적 건립기우등위기인특이인물연신적고분변솔용해곡선법(allele-specific-extension high resolution melting curve analysis,ASE-HRM).방법 ASE-HRM법시재보통고분변솔용해곡선법(high resolution melting curve analysis,HRM)적PCR반응체계중가입일조등위기인특이성연신인물(allele-specific-extension,ASE),해인물말단종지우단핵감산다태성(single nucleotide polymorphism,SNP)위점,필배일충등위기인.증가열순배차수,사등위기인특이성인물득이연신.선취rs1 869 458위점,용ASE-HRM법화직접측서법대194개인원기인조DNA양품진행기인분형.결과 통과분석용해곡선확증봉,가구분잡합형화순합형SNP;통과분석유무인물연신봉,가구분2충순합형;동시증명장도위11도13개감기적ASE인물능득도교호적분형결과;사용쇄정핵산(locked nucleic acid,LNA)수식확증인물가증가확증산물화연신산물적해련온도(melting temperature,Tm)차거,간화기인분형.2충방법대소선DNA양품기인분형소득결과완전문합.결론 ASE-HRM시일충간단、렴개、폐관병능용우검측소유류형SNP적기인분형법.