林业科技开发
林業科技開髮
임업과기개발
CHINA FORESTRY SCIENCE AND TECHNOLOGY
2009年
2期
25-29
,共5页
响叶杨%银白杨%SRAP%正交设计
響葉楊%銀白楊%SRAP%正交設計
향협양%은백양%SRAP%정교설계
以响叶杨和银白杨及F1代为实验材料,利用正交设计直观分析法和单因素随机试验对杨树SRAP反应体系中各组分(TaqDNA聚合酶、dNTP、引物和Mg2+)的浓度进行优化;通过实验确定10μL反应体系为:引物0.35μmol/L,TaqDNA聚合酶0.5U,dNTP0.2 mmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,10×PCRbuffer 1μL,模板DNA 1μl(20 ng/μL).同时利用最佳反应体系以及正交设计直观分析法对PCR扩增程序进行筛选,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度.结果表明最佳反应程序为:开始94℃变性5min,反应前5个循环在94℃1 min,37℃30 s,72℃ 1min条件下运行;之后35个循环在94℃1 min,54℃ 1 min,72℃ 1 min条件下运行,最后延伸7 min;12℃保存.并利用两树种的杂种F1代对优化的反应体系和程序的可行性进行了验证.
以響葉楊和銀白楊及F1代為實驗材料,利用正交設計直觀分析法和單因素隨機試驗對楊樹SRAP反應體繫中各組分(TaqDNA聚閤酶、dNTP、引物和Mg2+)的濃度進行優化;通過實驗確定10μL反應體繫為:引物0.35μmol/L,TaqDNA聚閤酶0.5U,dNTP0.2 mmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,10×PCRbuffer 1μL,模闆DNA 1μl(20 ng/μL).同時利用最佳反應體繫以及正交設計直觀分析法對PCR擴增程序進行篩選,併通過梯度PCR試驗,確定引物最佳退火溫度.結果錶明最佳反應程序為:開始94℃變性5min,反應前5箇循環在94℃1 min,37℃30 s,72℃ 1min條件下運行;之後35箇循環在94℃1 min,54℃ 1 min,72℃ 1 min條件下運行,最後延伸7 min;12℃保存.併利用兩樹種的雜種F1代對優化的反應體繫和程序的可行性進行瞭驗證.
이향협양화은백양급F1대위실험재료,이용정교설계직관분석법화단인소수궤시험대양수SRAP반응체계중각조분(TaqDNA취합매、dNTP、인물화Mg2+)적농도진행우화;통과실험학정10μL반응체계위:인물0.35μmol/L,TaqDNA취합매0.5U,dNTP0.2 mmol/L,Mg2+2.0 mmol/L,10×PCRbuffer 1μL,모판DNA 1μl(20 ng/μL).동시이용최가반응체계이급정교설계직관분석법대PCR확증정서진행사선,병통과제도PCR시험,학정인물최가퇴화온도.결과표명최가반응정서위:개시94℃변성5min,반응전5개순배재94℃1 min,37℃30 s,72℃ 1min조건하운행;지후35개순배재94℃1 min,54℃ 1 min,72℃ 1 min조건하운행,최후연신7 min;12℃보존.병이용량수충적잡충F1대대우화적반응체계화정서적가행성진행료험증.
