生物技术
生物技術
생물기술
BIOTECHNOLOGY
2008年
5期
11-16
,共6页
张春龙%何秋璟%仁哲%朱钦昌%张美英%刘秋英%张佩琢%王一飞
張春龍%何鞦璟%仁哲%硃欽昌%張美英%劉鞦英%張珮琢%王一飛
장춘룡%하추경%인철%주흠창%장미영%류추영%장패탁%왕일비
siRNA%RNA干扰%UL30基因/DNA聚合酶/HSV-1
siRNA%RNA榦擾%UL30基因/DNA聚閤酶/HSV-1
siRNA%RNA간우%UL30기인/DNA취합매/HSV-1
目的:筛选高效沉默HSV-1 UL30基因的siRNA,研究siPNA沉默UL30基因后对HSV-1繁殖的影响.方法:设计并化学合成12对靶向UL30基因的siRNA,与pEGFP-N1-Fi融合表达质粒共转染VERO细胞,流式细胞术筛选高效抑制Fi-EGFP融合蛋白的siRNA,实时荧光定量PCR检测siRNA对感染细胞内UL30mRNA表达的抑制效果,CPE法和空斑减数实验评价siRNA对HSV-1繁殖的抑制效果.结果:共转染实验筛选出高效抑制Fi-EGFP融合蛋白的siRNA4、siRNA10及siRNA8,这3对siRNA均能显著降低感染细胞内UL30 mRNA的表达水平及病变细胞释放到培养上清的子代病毒滴度,siRNA4和siRNA10在感染后36 h对HSV-1的繁殖有明显的抑制效果,其病斑分别比对照组减少61.17%、51.46%(P<0.05),siRNA4、siRNA10及siRNA8组最终形成的空斑直径分别比对照组减小29.94%、23.49%、21.69%(P<0.01).结论:筛选到高效抑制UL30的3对siRNAs,siRNA4及siRNA10在病斑形成早期对HSV-1的繁殖有明显的抑制效果,说明siRNA4、siRNA10及siRNA8均能延缓病斑的扩大和病斑数目的增长,对病毒的繁殖有一定的抑制效果.
目的:篩選高效沉默HSV-1 UL30基因的siRNA,研究siPNA沉默UL30基因後對HSV-1繁殖的影響.方法:設計併化學閤成12對靶嚮UL30基因的siRNA,與pEGFP-N1-Fi融閤錶達質粒共轉染VERO細胞,流式細胞術篩選高效抑製Fi-EGFP融閤蛋白的siRNA,實時熒光定量PCR檢測siRNA對感染細胞內UL30mRNA錶達的抑製效果,CPE法和空斑減數實驗評價siRNA對HSV-1繁殖的抑製效果.結果:共轉染實驗篩選齣高效抑製Fi-EGFP融閤蛋白的siRNA4、siRNA10及siRNA8,這3對siRNA均能顯著降低感染細胞內UL30 mRNA的錶達水平及病變細胞釋放到培養上清的子代病毒滴度,siRNA4和siRNA10在感染後36 h對HSV-1的繁殖有明顯的抑製效果,其病斑分彆比對照組減少61.17%、51.46%(P<0.05),siRNA4、siRNA10及siRNA8組最終形成的空斑直徑分彆比對照組減小29.94%、23.49%、21.69%(P<0.01).結論:篩選到高效抑製UL30的3對siRNAs,siRNA4及siRNA10在病斑形成早期對HSV-1的繁殖有明顯的抑製效果,說明siRNA4、siRNA10及siRNA8均能延緩病斑的擴大和病斑數目的增長,對病毒的繁殖有一定的抑製效果.
목적:사선고효침묵HSV-1 UL30기인적siRNA,연구siPNA침묵UL30기인후대HSV-1번식적영향.방법:설계병화학합성12대파향UL30기인적siRNA,여pEGFP-N1-Fi융합표체질립공전염VERO세포,류식세포술사선고효억제Fi-EGFP융합단백적siRNA,실시형광정량PCR검측siRNA대감염세포내UL30mRNA표체적억제효과,CPE법화공반감수실험평개siRNA대HSV-1번식적억제효과.결과:공전염실험사선출고효억제Fi-EGFP융합단백적siRNA4、siRNA10급siRNA8,저3대siRNA균능현저강저감염세포내UL30 mRNA적표체수평급병변세포석방도배양상청적자대병독적도,siRNA4화siRNA10재감염후36 h대HSV-1적번식유명현적억제효과,기병반분별비대조조감소61.17%、51.46%(P<0.05),siRNA4、siRNA10급siRNA8조최종형성적공반직경분별비대조조감소29.94%、23.49%、21.69%(P<0.01).결론:사선도고효억제UL30적3대siRNAs,siRNA4급siRNA10재병반형성조기대HSV-1적번식유명현적억제효과,설명siRNA4、siRNA10급siRNA8균능연완병반적확대화병반수목적증장,대병독적번식유일정적억제효과.
