中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2007年
6期
422-427
,共6页
赵源%胡忠义%景奉香%刘志辉%王洁%郑瑞娟%陆俊梅%赵辉%尹俊
趙源%鬍忠義%景奉香%劉誌輝%王潔%鄭瑞娟%陸俊梅%趙輝%尹俊
조원%호충의%경봉향%류지휘%왕길%정서연%륙준매%조휘%윤준
芯片分析技术%分枝杆菌属%DNA,细菌%聚合酶链反应
芯片分析技術%分枝桿菌屬%DNA,細菌%聚閤酶鏈反應
심편분석기술%분지간균속%DNA,세균%취합매련반응
目的 利用显色法芯片技术建立快速鉴定分枝杆菌菌种的方法.方法 根据美国国家生物技术信息中心(NCBI)提供的分枝杆菌16S rDNA基因的保守区和突变区(第129～267位核苷酸的A突变区、第430～500位核苷酸的B突变区)分别设计引物和寡核苷酸探针,用地高辛标记引物并制备玻璃芯片.采用双重PCR技术分别对16种分枝杆菌标准株、5种非分枝杆菌标准株和120株分枝杆菌临床分离株(非结核分枝杆菌40株、结核分枝杆菌复合群80株)进行扩增,扩增产物分别与玻璃芯片进行杂交检测,尼龙膜显色,以显现蓝黑色斑点作为阳性信号,并根据其在芯片方阵中的位置判断分枝杆菌种类.根据芯片杂交结果,选取部分经显色法芯片技术检测的临床分离株进行DNA测序.结果 16种分枝杆菌标准株和120株分枝杆菌临床分离株经PCR扩增均各产生2条DNA片段,其中1条长度为272～280 bp,1条长度为183～192 bp.16种分枝杆菌标准株均与芯片上特异性探针杂交,应用显色法芯片技术分析16种分枝杆菌标准株和5种非分枝杆菌标准株的特异性为100%.120株分枝杆菌临床分离株均与分枝杆菌属探针a杂交,其中79株确定为结核分枝杆菌复合群,38株确定为非结核分枝杆菌(不产色分枝杆菌17株,胞内分枝杆菌8株,猿猴分支杆菌6株,瘰疬分枝杆菌5株,偶然分支杆菌2株),另3株只与分枝杆菌属探针a杂交,没有鉴定到种.选取的26株分枝杆菌临床分离株(结核分枝杆菌复合群8株,不产色分枝杆菌5株,胞内分枝杆菌、猿猴分枝杆菌、未鉴定到种的分枝杆菌各3株,瘰疬分枝杆菌、偶然分枝杆菌各2株)DNA测序显示,未鉴定到种的3株分枝杆菌中,1株为结核分枝杆菌突变株,1株为 Mycobacterium lentiflavum,1株为 Mycobacterium arupense,芯片上无后2种菌株的特异性探针;其余23株菌株测序结果与芯片检测结果一致.结论 显色法芯片技术能简便、快速、灵敏、特异地将大多数分枝杆菌鉴定到种,具有一定的临床推广应用价值.
目的 利用顯色法芯片技術建立快速鑒定分枝桿菌菌種的方法.方法 根據美國國傢生物技術信息中心(NCBI)提供的分枝桿菌16S rDNA基因的保守區和突變區(第129～267位覈苷痠的A突變區、第430～500位覈苷痠的B突變區)分彆設計引物和寡覈苷痠探針,用地高辛標記引物併製備玻璃芯片.採用雙重PCR技術分彆對16種分枝桿菌標準株、5種非分枝桿菌標準株和120株分枝桿菌臨床分離株(非結覈分枝桿菌40株、結覈分枝桿菌複閤群80株)進行擴增,擴增產物分彆與玻璃芯片進行雜交檢測,尼龍膜顯色,以顯現藍黑色斑點作為暘性信號,併根據其在芯片方陣中的位置判斷分枝桿菌種類.根據芯片雜交結果,選取部分經顯色法芯片技術檢測的臨床分離株進行DNA測序.結果 16種分枝桿菌標準株和120株分枝桿菌臨床分離株經PCR擴增均各產生2條DNA片段,其中1條長度為272～280 bp,1條長度為183～192 bp.16種分枝桿菌標準株均與芯片上特異性探針雜交,應用顯色法芯片技術分析16種分枝桿菌標準株和5種非分枝桿菌標準株的特異性為100%.120株分枝桿菌臨床分離株均與分枝桿菌屬探針a雜交,其中79株確定為結覈分枝桿菌複閤群,38株確定為非結覈分枝桿菌(不產色分枝桿菌17株,胞內分枝桿菌8株,猿猴分支桿菌6株,瘰疬分枝桿菌5株,偶然分支桿菌2株),另3株隻與分枝桿菌屬探針a雜交,沒有鑒定到種.選取的26株分枝桿菌臨床分離株(結覈分枝桿菌複閤群8株,不產色分枝桿菌5株,胞內分枝桿菌、猿猴分枝桿菌、未鑒定到種的分枝桿菌各3株,瘰疬分枝桿菌、偶然分枝桿菌各2株)DNA測序顯示,未鑒定到種的3株分枝桿菌中,1株為結覈分枝桿菌突變株,1株為 Mycobacterium lentiflavum,1株為 Mycobacterium arupense,芯片上無後2種菌株的特異性探針;其餘23株菌株測序結果與芯片檢測結果一緻.結論 顯色法芯片技術能簡便、快速、靈敏、特異地將大多數分枝桿菌鑒定到種,具有一定的臨床推廣應用價值.
목적 이용현색법심편기술건립쾌속감정분지간균균충적방법.방법 근거미국국가생물기술신식중심(NCBI)제공적분지간균16S rDNA기인적보수구화돌변구(제129～267위핵감산적A돌변구、제430～500위핵감산적B돌변구)분별설계인물화과핵감산탐침,용지고신표기인물병제비파리심편.채용쌍중PCR기술분별대16충분지간균표준주、5충비분지간균표준주화120주분지간균림상분리주(비결핵분지간균40주、결핵분지간균복합군80주)진행확증,확증산물분별여파리심편진행잡교검측,니룡막현색,이현현람흑색반점작위양성신호,병근거기재심편방진중적위치판단분지간균충류.근거심편잡교결과,선취부분경현색법심편기술검측적림상분리주진행DNA측서.결과 16충분지간균표준주화120주분지간균림상분리주경PCR확증균각산생2조DNA편단,기중1조장도위272～280 bp,1조장도위183～192 bp.16충분지간균표준주균여심편상특이성탐침잡교,응용현색법심편기술분석16충분지간균표준주화5충비분지간균표준주적특이성위100%.120주분지간균림상분리주균여분지간균속탐침a잡교,기중79주학정위결핵분지간균복합군,38주학정위비결핵분지간균(불산색분지간균17주,포내분지간균8주,원후분지간균6주,라력분지간균5주,우연분지간균2주),령3주지여분지간균속탐침a잡교,몰유감정도충.선취적26주분지간균림상분리주(결핵분지간균복합군8주,불산색분지간균5주,포내분지간균、원후분지간균、미감정도충적분지간균각3주,라력분지간균、우연분지간균각2주)DNA측서현시,미감정도충적3주분지간균중,1주위결핵분지간균돌변주,1주위 Mycobacterium lentiflavum,1주위 Mycobacterium arupense,심편상무후2충균주적특이성탐침;기여23주균주측서결과여심편검측결과일치.결론 현색법심편기술능간편、쾌속、령민、특이지장대다수분지간균감정도충,구유일정적림상추엄응용개치.
