生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2008年
1期
63-68
,共6页
高剑坤%蔡绍皙%范开%冯强%陈海蓉%张益%胡伟%杨应彬
高劍坤%蔡紹皙%範開%馮彊%陳海蓉%張益%鬍偉%楊應彬
고검곤%채소석%범개%풍강%진해용%장익%호위%양응빈
表达系统%人胰岛素原%甲醇酵母
錶達繫統%人胰島素原%甲醇酵母
표체계통%인이도소원%갑순효모
合成含短C肽AAK,并去掉B链第30位苏氨酸(T)的人胰岛素原类似物:HMPIDesB30(human mini-proinsulin des B30)的cDNA,将其插入大肠杆菌和酵母菌的穿梭质粒pPIC9K.用电转移的方法将重组质粒HMPIDesB30/pPIC9K转入甲醇酵母GS115.用含不同G418浓度的YPD平板筛选高拷贝重组子.经优化条件下的高密度发酵,发酵液用SIPI-40大孔树脂吸附,大孔吸附树脂洗脱液经SP柱进一步纯化后,再用10～20 mmol/L Zn2+沉淀,能得到纯度为95%的HMPIDesB30.通过16.5%Tricine SDS-PAGE、HPLC和质谱分析,表达产物分子质量与理论分子质量相符,经高密度发酵,表达量可达1.0 g/L.纯化回收率可达60%.说明人胰岛素原类似物HMPIDesB30能在甲醇酵母中高效分泌表达,并能通过经济有效的方法纯化.
閤成含短C肽AAK,併去掉B鏈第30位囌氨痠(T)的人胰島素原類似物:HMPIDesB30(human mini-proinsulin des B30)的cDNA,將其插入大腸桿菌和酵母菌的穿梭質粒pPIC9K.用電轉移的方法將重組質粒HMPIDesB30/pPIC9K轉入甲醇酵母GS115.用含不同G418濃度的YPD平闆篩選高拷貝重組子.經優化條件下的高密度髮酵,髮酵液用SIPI-40大孔樹脂吸附,大孔吸附樹脂洗脫液經SP柱進一步純化後,再用10～20 mmol/L Zn2+沉澱,能得到純度為95%的HMPIDesB30.通過16.5%Tricine SDS-PAGE、HPLC和質譜分析,錶達產物分子質量與理論分子質量相符,經高密度髮酵,錶達量可達1.0 g/L.純化迴收率可達60%.說明人胰島素原類似物HMPIDesB30能在甲醇酵母中高效分泌錶達,併能通過經濟有效的方法純化.
합성함단C태AAK,병거도B련제30위소안산(T)적인이도소원유사물:HMPIDesB30(human mini-proinsulin des B30)적cDNA,장기삽입대장간균화효모균적천사질립pPIC9K.용전전이적방법장중조질립HMPIDesB30/pPIC9K전입갑순효모GS115.용함불동G418농도적YPD평판사선고고패중조자.경우화조건하적고밀도발효,발효액용SIPI-40대공수지흡부,대공흡부수지세탈액경SP주진일보순화후,재용10～20 mmol/L Zn2+침정,능득도순도위95%적HMPIDesB30.통과16.5%Tricine SDS-PAGE、HPLC화질보분석,표체산물분자질량여이론분자질량상부,경고밀도발효,표체량가체1.0 g/L.순화회수솔가체60%.설명인이도소원유사물HMPIDesB30능재갑순효모중고효분비표체,병능통과경제유효적방법순화.
