CAJ | 학술논문

目的探讨HCV核心蛋白与(HCBP1)HCV核心蛋白的相互作用蛋白在真核细胞内的相互作用.构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与HCBP1融合蛋白真核表达载体,分析其在COS-7细胞中的表达和亚细胞定位.方法 PCR分别扩增含HCV核心及HCBP1的cDNA片段,克隆入pGEMT载体,经测序正确后,分别克隆入哺乳双杂交的表达质粒pM和pVP16中,并转染入COS-7细胞,48 h后检测细胞中报告基因CAT的表达水平.将HCBP1的cDNA片段克隆入绿色荧光表达载体pEGFP-C1中,构建HCBP1-EGFP融合蛋白的表达载体,转染COS-7细胞,以Western blot和荧光显微镜分析融合蛋白的表达及其细胞定位.结果 CAT-ELISA检测显示pM-核心蛋白与pVP16-HCBP1实验孔吸光度值高于其他阴性对照,但低于阳性对照组.成功构建HCBP1-EGFP融合蛋白的表达载体,Western blot证实融合蛋白在转染细胞中的表达,荧光显微镜示HCBP1-EGFP融合蛋白分布于细胞浆,而转染空载体的细胞内EGFP的分布无明显改变.结论成功构建HCBP1-EGFP融合蛋白表达载体,并在COS-7细胞中得到表达.哺乳双杂交系统证实HCV核心蛋白与新基因HCBP1确有一定的相互作用.
목적 탐토HCV핵심단백여(HCBP1)HCV핵심단백적상호작용단백재진핵세포내적상호작용.구건증강형록색형광단백(EGFP)여HCBP1융합단백진핵표체재체,분석기재COS-7세포중적표체화아세포정위.방법 PCR분별확증함HCV핵심급HCBP1적cDNA편단,극륭입pGEMT재체,경측서정학후,분별극륭입포유쌍잡교적표체질립pM화pVP16중,병전염입COS-7세포,48 h후검측세포중보고기인CAT적표체수평.장HCBP1적cDNA편단극륭입록색형광표체재체pEGFP-C1중,구건HCBP1-EGFP융합단백적표체재체,전염COS-7세포,이Western blot화형광현미경분석융합단백적표체급기세포정위.결과 CAT-ELISA검측현시pM-핵심단백여pVP16-HCBP1실험공흡광도치고우기타음성대조,단저우양성대조조.성공구건HCBP1-EGFP융합단백적표체재체,Western blot증실융합단백재전염세포중적표체,형광현미경시HCBP1-EGFP융합단백분포우세포장,이전염공재체적세포내EGFP적분포무명현개변.결론 성공구건HCBP1-EGFP융합단백표체재체,병재COS-7세포중득도표체.포유쌍잡교계통증실HCV핵심단백여신기인HCBP1학유일정적상호작용.