CAJ | 학술논문

目的:探讨转基因JAK2介导的脐血干祖细胞长期扩增调控的可行性和转基因细胞的生物学特征.方法:构建逆转录病毒载体MGI-F2JAK2,内含有JAK2基因的功能催化区和2个与小分子靶向基因合成药物(AP20187)结合的位点蛋白(F36v,F2).应用MiniMACS磁珠分选系统纯化分离脐血CD 34+细胞,用含JAK2的逆转录病毒上清转染脐血CD 34+细胞.转染后的CD 34+细胞在IMDM培养体系中,将细胞分为AP20187组;FL组;TPO组;AP20187+FL+TPO(AFT)组.对扩增后的细胞定期检测基因转移后GFP动态变化、细胞免疫标记、造血祖细胞集落培养、染色体核型分析和裸鼠致瘤实验.结果:分选的CD 34+细胞纯度＞91%,基因转移率为的.32%:±6.21%;只有AP20187+FL+TPO组可以使转基因的脐血CD 34+细胞大量增殖,扩增至第8周时细胞数达109,CD34+细胞GFP的阳性率由基线水平逐渐上升并于第8周时达到90%以上;细胞表型为CD33+、CD61+、Gly-A+部分阳性CD38+、HLA-DR+强阳性;CD2、CD7、CD19接近阴性.扩增的CD34+细胞可分别形成BFU-E、CFU-GM、CFU-Mix并以CFU-GM集落为主.扩增后CD34+细胞检测染色体核型正常,裸鼠实验无致瘤特性.结论:转染JAK2基因的人脐血CD34+细胞协同FL和TPO细胞因子可以体外长期扩增脐血干祖细胞,对今后研究细胞信号转导、造血调控以及开展干细胞和基因治疗都有潜在的应用价值.
목적:탐토전기인JAK2개도적제혈간조세포장기확증조공적가행성화전기인세포적생물학특정.방법:구건역전록병독재체MGI-F2JAK2,내함유JAK2기인적공능최화구화2개여소분자파향기인합성약물(AP20187)결합적위점단백(F36v,F2).응용MiniMACS자주분선계통순화분리제혈CD 34+세포,용함JAK2적역전록병독상청전염제혈CD 34+세포.전염후적CD 34+세포재IMDM배양체계중,장세포분위AP20187조;FL조;TPO조;AP20187+FL+TPO(AFT)조.대확증후적세포정기검측기인전이후GFP동태변화、세포면역표기、조혈조세포집락배양、염색체핵형분석화라서치류실험.결과:분선적CD 34+세포순도＞91%,기인전이솔위적.32%:±6.21%;지유AP20187+FL+TPO조가이사전기인적제혈CD 34+세포대량증식,확증지제8주시세포수체109,CD34+세포GFP적양성솔유기선수평축점상승병우제8주시체도90%이상;세포표형위CD33+、CD61+、Gly-A+부분양성CD38+、HLA-DR+강양성;CD2、CD7、CD19접근음성.확증적CD34+세포가분별형성BFU-E、CFU-GM、CFU-Mix병이CFU-GM집락위주.확증후CD34+세포검측염색체핵형정상,라서실험무치류특성.결론:전염JAK2기인적인제혈CD34+세포협동FL화TPO세포인자가이체외장기확증제혈간조세포,대금후연구세포신호전도、조혈조공이급개전간세포화기인치료도유잠재적응용개치.