中国生物工程杂志
中國生物工程雜誌
중국생물공정잡지
JOURNAL OF CHINESE BIOTECHNOLOGY
2007年
12期
11-16
,共6页
黄亚东%苏烨%丁长才%张敏静%李校堃%苏志坚
黃亞東%囌燁%丁長纔%張敏靜%李校堃%囌誌堅
황아동%소엽%정장재%장민정%리교곤%소지견
金属硫蛋白%融合蛋白%表达%纯化%结合重金属离子
金屬硫蛋白%融閤蛋白%錶達%純化%結閤重金屬離子
금속류단백%융합단백%표체%순화%결합중금속리자
将编码融合蛋白GST-SUMO-MT的DNA片段连接到大肠杆菌表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-GS-MT并转化到大肠杆菌Origami(DE3)中.20℃,1mmol/L的IPTG诱导20h后,获得分子量约为43kDa的融合蛋白,表达量占菌体上清总蛋白的38.4%.利用谷胱甘肽交联琼脂糖(glutathione sepharose 4B)凝胶柱和Sephardex G-25分子筛联用可以得到纯度为95%以上的融合蛋白,得率约为70mg/L.该融合蛋白可与GST抗体产生阳性反应.融合蛋白GST-SUMO-MT可以显著提高宿主对Cd2+、Zn2+和Cu2+离子聚积的能力,其耐受能力比对照组分别提高4.2倍、4倍及1.6倍.此外,原子吸收光谱法测定,每分子GST-SUMO-MT可以结合2～3个Cd2+离子.
將編碼融閤蛋白GST-SUMO-MT的DNA片段連接到大腸桿菌錶達載體pET-28a中,構建重組錶達質粒pET-GS-MT併轉化到大腸桿菌Origami(DE3)中.20℃,1mmol/L的IPTG誘導20h後,穫得分子量約為43kDa的融閤蛋白,錶達量佔菌體上清總蛋白的38.4%.利用穀胱甘肽交聯瓊脂糖(glutathione sepharose 4B)凝膠柱和Sephardex G-25分子篩聯用可以得到純度為95%以上的融閤蛋白,得率約為70mg/L.該融閤蛋白可與GST抗體產生暘性反應.融閤蛋白GST-SUMO-MT可以顯著提高宿主對Cd2+、Zn2+和Cu2+離子聚積的能力,其耐受能力比對照組分彆提高4.2倍、4倍及1.6倍.此外,原子吸收光譜法測定,每分子GST-SUMO-MT可以結閤2～3箇Cd2+離子.
장편마융합단백GST-SUMO-MT적DNA편단련접도대장간균표체재체pET-28a중,구건중조표체질립pET-GS-MT병전화도대장간균Origami(DE3)중.20℃,1mmol/L적IPTG유도20h후,획득분자량약위43kDa적융합단백,표체량점균체상청총단백적38.4%.이용곡광감태교련경지당(glutathione sepharose 4B)응효주화Sephardex G-25분자사련용가이득도순도위95%이상적융합단백,득솔약위70mg/L.해융합단백가여GST항체산생양성반응.융합단백GST-SUMO-MT가이현저제고숙주대Cd2+、Zn2+화Cu2+리자취적적능력,기내수능력비대조조분별제고4.2배、4배급1.6배.차외,원자흡수광보법측정,매분자GST-SUMO-MT가이결합2～3개Cd2+리자.
