中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2007年
46期
9289-9292
,共4页
孙蕾%吴雅臻%于雷%冯相伟
孫蕾%吳雅臻%于雷%馮相偉
손뢰%오아진%우뢰%풍상위
RNA干扰%shRNA%血小板源性生长因子A%质粒
RNA榦擾%shRNA%血小闆源性生長因子A%質粒
RNA간우%shRNA%혈소판원성생장인자A%질립
目的:血小板源性生长因子对诱发视网膜色素上皮细胞移行、最终导致增生性玻璃体视网膜病变起到了重要作用.构建人血小板源性生长因子A具有发夹结构小干扰RNA(shRNA)表达质粒,以观察其对人血小板源性生长因子A基因表达的沉默效果.方法:实验于2007-04/2007-07在吉林大学第一临床医院传染科研究室完成.根据血小板源性生长因子A基因mRNA序列,设计有小发夹结构的3条寡核苷酸序列,克隆到空载体pGPU6/GFP/Neo中,构建重组质粒,同时设计构建分别针对人GAPDH干扰质粒作为阳性对照,不针对任何特异基因的质粒作为阴性对照.通过酶切鉴定和测序验证阳性克隆.结果:经重组质粒筛选,重组质粒测序鉴定与设计的shRNA转录模板序列相同,均证实重组质粒构建成功.结论:利用RNA干扰技术路线可成功构建靶向人血小板源性生长因子A的发夹结构小干扰RNA表达载体.
目的:血小闆源性生長因子對誘髮視網膜色素上皮細胞移行、最終導緻增生性玻璃體視網膜病變起到瞭重要作用.構建人血小闆源性生長因子A具有髮夾結構小榦擾RNA(shRNA)錶達質粒,以觀察其對人血小闆源性生長因子A基因錶達的沉默效果.方法:實驗于2007-04/2007-07在吉林大學第一臨床醫院傳染科研究室完成.根據血小闆源性生長因子A基因mRNA序列,設計有小髮夾結構的3條寡覈苷痠序列,剋隆到空載體pGPU6/GFP/Neo中,構建重組質粒,同時設計構建分彆針對人GAPDH榦擾質粒作為暘性對照,不針對任何特異基因的質粒作為陰性對照.通過酶切鑒定和測序驗證暘性剋隆.結果:經重組質粒篩選,重組質粒測序鑒定與設計的shRNA轉錄模闆序列相同,均證實重組質粒構建成功.結論:利用RNA榦擾技術路線可成功構建靶嚮人血小闆源性生長因子A的髮夾結構小榦擾RNA錶達載體.
목적:혈소판원성생장인자대유발시망막색소상피세포이행、최종도치증생성파리체시망막병변기도료중요작용.구건인혈소판원성생장인자A구유발협결구소간우RNA(shRNA)표체질립,이관찰기대인혈소판원성생장인자A기인표체적침묵효과.방법:실험우2007-04/2007-07재길림대학제일림상의원전염과연구실완성.근거혈소판원성생장인자A기인mRNA서렬,설계유소발협결구적3조과핵감산서렬,극륭도공재체pGPU6/GFP/Neo중,구건중조질립,동시설계구건분별침대인GAPDH간우질립작위양성대조,불침대임하특이기인적질립작위음성대조.통과매절감정화측서험증양성극륭.결과:경중조질립사선,중조질립측서감정여설계적shRNA전록모판서렬상동,균증실중조질립구건성공.결론:이용RNA간우기술로선가성공구건파향인혈소판원성생장인자A적발협결구소간우RNA표체재체.
