细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2007年
12期
1163-1166
,共4页
李文生%刘红莉%张盈涛%杨筱风%王一理%司履生
李文生%劉紅莉%張盈濤%楊篠風%王一理%司履生
리문생%류홍리%장영도%양소풍%왕일리%사리생
HPV58%减毒志贺氏杆菌%疫苗%同源重组
HPV58%減毒誌賀氏桿菌%疫苗%同源重組
HPV58%감독지하씨간균%역묘%동원중조
目的:构建预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗,并研究其免疫学特性.方法:克隆HPV58L1基因并重组入自杀载体pCVD442,减毒志贺氏杆菌Sf301:△virG、辅助质粒PRK2013、重组自杀载体pCVD442-HPV58L1进行筛选杂交,经氨苄抗性培养基、刚果红培养基双重选择,获得重组的含HPV58L1基因的减毒志贺氏杆菌菌株.Western blot检测HPV58L1蛋白表达.用豚鼠角结膜炎模型进行疫苗动物免疫试验,ELISA检测豚鼠血清中特异性抗体,ELISPOT检测豚鼠脾及淋巴结中抗原特异性IgG、IgA产生细胞频数.结果:Western blot法证实该菌株可表达HPV58L1蛋白.豚鼠免疫保护试验发现:HPV58L1-减毒志贺氏杆菌不引起角结膜炎,经用野生型sf301攻击后有80%豚鼠不发病.免疫后第20天,免疫豚鼠血中抗HPV58L1特异性IgG、IgA明显升高,而对志贺氏杆菌菌体抗原(LPS)仅产生低效价的IgG抗体.EHSPOT结果显示,脾和淋巴结的IgA-ASC及IgG-ASC明显升高.结论:成功构建了预防性重组HPV58-减毒志贺氏杆菌载体活疫苗,能诱发免疫动物较强的体液免疫反应,激发保护性抗体的产生.
目的:構建預防性重組HPV58-減毒誌賀氏桿菌載體活疫苗,併研究其免疫學特性.方法:剋隆HPV58L1基因併重組入自殺載體pCVD442,減毒誌賀氏桿菌Sf301:△virG、輔助質粒PRK2013、重組自殺載體pCVD442-HPV58L1進行篩選雜交,經氨芐抗性培養基、剛果紅培養基雙重選擇,穫得重組的含HPV58L1基因的減毒誌賀氏桿菌菌株.Western blot檢測HPV58L1蛋白錶達.用豚鼠角結膜炎模型進行疫苗動物免疫試驗,ELISA檢測豚鼠血清中特異性抗體,ELISPOT檢測豚鼠脾及淋巴結中抗原特異性IgG、IgA產生細胞頻數.結果:Western blot法證實該菌株可錶達HPV58L1蛋白.豚鼠免疫保護試驗髮現:HPV58L1-減毒誌賀氏桿菌不引起角結膜炎,經用野生型sf301攻擊後有80%豚鼠不髮病.免疫後第20天,免疫豚鼠血中抗HPV58L1特異性IgG、IgA明顯升高,而對誌賀氏桿菌菌體抗原(LPS)僅產生低效價的IgG抗體.EHSPOT結果顯示,脾和淋巴結的IgA-ASC及IgG-ASC明顯升高.結論:成功構建瞭預防性重組HPV58-減毒誌賀氏桿菌載體活疫苗,能誘髮免疫動物較彊的體液免疫反應,激髮保護性抗體的產生.
목적:구건예방성중조HPV58-감독지하씨간균재체활역묘,병연구기면역학특성.방법:극륭HPV58L1기인병중조입자살재체pCVD442,감독지하씨간균Sf301:△virG、보조질립PRK2013、중조자살재체pCVD442-HPV58L1진행사선잡교,경안변항성배양기、강과홍배양기쌍중선택,획득중조적함HPV58L1기인적감독지하씨간균균주.Western blot검측HPV58L1단백표체.용돈서각결막염모형진행역묘동물면역시험,ELISA검측돈서혈청중특이성항체,ELISPOT검측돈서비급림파결중항원특이성IgG、IgA산생세포빈수.결과:Western blot법증실해균주가표체HPV58L1단백.돈서면역보호시험발현:HPV58L1-감독지하씨간균불인기각결막염,경용야생형sf301공격후유80%돈서불발병.면역후제20천,면역돈서혈중항HPV58L1특이성IgG、IgA명현승고,이대지하씨간균균체항원(LPS)부산생저효개적IgG항체.EHSPOT결과현시,비화림파결적IgA-ASC급IgG-ASC명현승고.결론:성공구건료예방성중조HPV58-감독지하씨간균재체활역묘,능유발면역동물교강적체액면역반응,격발보호성항체적산생.
