热带病与寄生虫学
熱帶病與寄生蟲學
열대병여기생충학
TROPICAL DISEASES AND PARASITOLOGY
2007年
2期
85-87
,共3页
周天祥%汪学龙%张衍兴%郑胜生%王旭旭%丁言荣
週天祥%汪學龍%張衍興%鄭勝生%王旭旭%丁言榮
주천상%왕학룡%장연흥%정성생%왕욱욱%정언영
猪囊尾蚴%抗原%基因克隆%表达
豬囊尾蚴%抗原%基因剋隆%錶達
저낭미유%항원%기인극륭%표체
目的 为了寻找猪囊尾蚴病新的免疫学候选诊断分子,克隆猪囊尾蚴抗原GP50编码基因,并进行表达、鉴定.方法 设计合成引物,用PCR法从猪囊尾蚴cDNA文库中扩增出猪囊尾蚴抗原GP50基因编码序列,将其克隆入pGEM-T载体,然后在真核表达载体pBKCMV中亚克隆,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot观察表达结果.结果 RT-PCR法扩增出一条大小约897bp的特异性片段,克隆质粒pGEM-GP50和真核表达质粒pBKCMV作BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切和以重组质粒为模板进行PCR扩增,均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段.诱导表达后,经SDS-PAGE可见一条约36kDa大小的融合蛋白条带,Western blot结果显示其可与猪囊尾蚴病人血清起反应.结论 本实验成功地克隆了猪囊尾蚴抗原GP50编码基因,并在原核细胞中进行了表达及鉴定,为进一步的免疫诊断研究奠定了基础.
目的 為瞭尋找豬囊尾蚴病新的免疫學候選診斷分子,剋隆豬囊尾蚴抗原GP50編碼基因,併進行錶達、鑒定.方法 設計閤成引物,用PCR法從豬囊尾蚴cDNA文庫中擴增齣豬囊尾蚴抗原GP50基因編碼序列,將其剋隆入pGEM-T載體,然後在真覈錶達載體pBKCMV中亞剋隆,用IPTG誘導錶達,SDS-PAGE和Western blot觀察錶達結果.結果 RT-PCR法擴增齣一條大小約897bp的特異性片段,剋隆質粒pGEM-GP50和真覈錶達質粒pBKCMV作BamH Ⅰ和Xho Ⅰ雙酶切和以重組質粒為模闆進行PCR擴增,均可穫得一條與PCR產物一緻的DNA片段.誘導錶達後,經SDS-PAGE可見一條約36kDa大小的融閤蛋白條帶,Western blot結果顯示其可與豬囊尾蚴病人血清起反應.結論 本實驗成功地剋隆瞭豬囊尾蚴抗原GP50編碼基因,併在原覈細胞中進行瞭錶達及鑒定,為進一步的免疫診斷研究奠定瞭基礎.
목적 위료심조저낭미유병신적면역학후선진단분자,극륭저낭미유항원GP50편마기인,병진행표체、감정.방법 설계합성인물,용PCR법종저낭미유cDNA문고중확증출저낭미유항원GP50기인편마서렬,장기극륭입pGEM-T재체,연후재진핵표체재체pBKCMV중아극륭,용IPTG유도표체,SDS-PAGE화Western blot관찰표체결과.결과 RT-PCR법확증출일조대소약897bp적특이성편단,극륭질립pGEM-GP50화진핵표체질립pBKCMV작BamH Ⅰ화Xho Ⅰ쌍매절화이중조질립위모판진행PCR확증,균가획득일조여PCR산물일치적DNA편단.유도표체후,경SDS-PAGE가견일조약36kDa대소적융합단백조대,Western blot결과현시기가여저낭미유병인혈청기반응.결론 본실험성공지극륭료저낭미유항원GP50편마기인,병재원핵세포중진행료표체급감정,위진일보적면역진단연구전정료기출.
