CAJ | 학술논문

目的:构建人颗粒溶素(Granulysin,GNLY)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达.方法:抽提体外培养的单个核细胞总RNA,通过RT-PCR的方法获得含有222 bp的颗粒溶素cDNA , 克隆到pMD18-T 载体,测序正确后再亚克隆到质粒pET28a(+) 中,构建重组表达质粒pET28a(+)-GNLY,在大肠杆菌中诱导表达并经Ni亲和层析纯化.用SDS-PAGE和Western blot对表达产物进行鉴定.采用MTT法检测GNLY融合蛋白的生物学活性.结果:酶切结果证实,成功地构建了GNLY原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致.结论:成功构建了重组表达质粒pET28a(+)-GNLY,并在大肠杆菌BL21(DE3)plysS中表达,获得了具有良好的抗原性和特异性的GNLY融合蛋白,为下一步研究人GNLY的功能奠定了基础.
목적:구건인과립용소(Granulysin,GNLY)기인적표체재체병재대장간균중표체.방법:추제체외배양적단개핵세포총RNA,통과RT-PCR적방법획득함유222 bp적과립용소cDNA , 극륭도pMD18-T 재체,측서정학후재아극륭도질립pET28a(+) 중,구건중조표체질립pET28a(+)-GNLY,재대장간균중유도표체병경Ni친화층석순화.용SDS-PAGE화Western blot대표체산물진행감정.채용MTT법검측GNLY융합단백적생물학활성.결과:매절결과증실,성공지구건료GNLY원핵표체재체,병재대장간균중획득은정적표체,표체산물적상대분자질량(Mr)동예기치상일치.결론:성공구건료중조표체질립pET28a(+)-GNLY,병재대장간균BL21(DE3)plysS중표체,획득료구유량호적항원성화특이성적GNLY융합단백,위하일보연구인GNLY적공능전정료기출.