浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2007年
4期
325-330
,共6页
徐熠熠%蓝建平%朱园园%余建%来晓喻%孙洁%黄河
徐熠熠%藍建平%硃園園%餘建%來曉喻%孫潔%黃河
서습습%람건평%주완완%여건%래효유%손길%황하
端粒%端粒结合蛋白类%端粒结合因子-1%ATM%磷酸化%细胞周期
耑粒%耑粒結閤蛋白類%耑粒結閤因子-1%ATM%燐痠化%細胞週期
단립%단립결합단백류%단립결합인자-1%ATM%린산화%세포주기
目的:研究端粒结合因子-1(TRF1)丝氨酸219位磷酸化对细胞周期的影响.方法:突变TRF1的219位氨基酸,构建模拟磷酸化和非磷酸化状态的突变体TRF1S219D-GFP和TRF1S219A-GFP,核苷酸测序和免疫印迹验证目的基因序列及蛋白表达.将野生型和突变体质粒用脂质体转染法转入HeLa细胞,观察它们在细胞中的定位、流式细胞仪检测各细胞周期的细胞数量、免疫印迹检测转染后ATM蛋白水平的改变.结果:测序证实突变成功,GFP抗体免疫印迹证实了突变体的蛋白表达.荧光显微镜下观察到TRF1S219A-GFP和TRF1S219D-GFP均呈点状定位于细胞端粒.流式细胞仪结果显示,过表达野生型和非磷酸化突变体的HeLa细胞产生G2/M期的阻滞(P＜0.05).转染野生型和突变体后HeLa细胞中ATM蛋白含量均比对照组增高.结论:ATM激酶对TRF1丝氨酸219位的磷酸化可以抑制由于TRF1过量表达而引起的细胞周期G2/M期的阻滞.
目的:研究耑粒結閤因子-1(TRF1)絲氨痠219位燐痠化對細胞週期的影響.方法:突變TRF1的219位氨基痠,構建模擬燐痠化和非燐痠化狀態的突變體TRF1S219D-GFP和TRF1S219A-GFP,覈苷痠測序和免疫印跡驗證目的基因序列及蛋白錶達.將野生型和突變體質粒用脂質體轉染法轉入HeLa細胞,觀察它們在細胞中的定位、流式細胞儀檢測各細胞週期的細胞數量、免疫印跡檢測轉染後ATM蛋白水平的改變.結果:測序證實突變成功,GFP抗體免疫印跡證實瞭突變體的蛋白錶達.熒光顯微鏡下觀察到TRF1S219A-GFP和TRF1S219D-GFP均呈點狀定位于細胞耑粒.流式細胞儀結果顯示,過錶達野生型和非燐痠化突變體的HeLa細胞產生G2/M期的阻滯(P＜0.05).轉染野生型和突變體後HeLa細胞中ATM蛋白含量均比對照組增高.結論:ATM激酶對TRF1絲氨痠219位的燐痠化可以抑製由于TRF1過量錶達而引起的細胞週期G2/M期的阻滯.
목적:연구단립결합인자-1(TRF1)사안산219위린산화대세포주기적영향.방법:돌변TRF1적219위안기산,구건모의린산화화비린산화상태적돌변체TRF1S219D-GFP화TRF1S219A-GFP,핵감산측서화면역인적험증목적기인서렬급단백표체.장야생형화돌변체질립용지질체전염법전입HeLa세포,관찰타문재세포중적정위、류식세포의검측각세포주기적세포수량、면역인적검측전염후ATM단백수평적개변.결과:측서증실돌변성공,GFP항체면역인적증실료돌변체적단백표체.형광현미경하관찰도TRF1S219A-GFP화TRF1S219D-GFP균정점상정위우세포단립.류식세포의결과현시,과표체야생형화비린산화돌변체적HeLa세포산생G2/M기적조체(P＜0.05).전염야생형화돌변체후HeLa세포중ATM단백함량균비대조조증고.결론:ATM격매대TRF1사안산219위적린산화가이억제유우TRF1과량표체이인기적세포주기G2/M기적조체.
