华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2007年
4期
29-32
,共4页
陈红英%崔保安%李新生%杨明凡%赵丽%方剑玉
陳紅英%崔保安%李新生%楊明凡%趙麗%方劍玉
진홍영%최보안%리신생%양명범%조려%방검옥
传染性喉气管炎病毒%GX基因%聚合酶链反应%序列分析
傳染性喉氣管炎病毒%GX基因%聚閤酶鏈反應%序列分析
전염성후기관염병독%GX기인%취합매련반응%서렬분석
根据GenBank中收录的鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)GX基因核苷酸序列,设计并合成了1对引物,应用PCR技术扩增ILTV河南株(ILTV-CG)GX基因.将ILTV-CG接种10日龄鸡胚,提取ILTV基因组DNA进行PCR扩增.将回收的PCR产物与pGEM-T Easy载体进行连接,转化JM109感受态细胞,经蓝白斑筛选,对菌液PCR和酶切鉴定为阳性的菌株进行测序.测序结果表明,所克隆的GX基因全长为950 bp,含有一个开放阅读框,编码299个氨基酸的多肽.推导的氨基酸有4个潜在的N-糖基化位点,有11个与二硫键形成有关的半胱氨酸.序列分析表明,克隆的ILTV-CG GX基因与GenBank中发表的ILTV-SA2株GX基因核苷酸同源性为97.2%,变异点为第124位插入1个碱基G,第136位又插入2个碱基C,从而引起该毒株GX基因推导的氨基酸序列在第33位插人1个亮氨酸,还存在多处氨基酸发生变化,氨基酸同源性为95.3%.GX基因的成功克隆为构建ILTV GX基因缺失的病毒活载体奠定基础.
根據GenBank中收錄的鷄傳染性喉氣管炎病毒(ILTV)GX基因覈苷痠序列,設計併閤成瞭1對引物,應用PCR技術擴增ILTV河南株(ILTV-CG)GX基因.將ILTV-CG接種10日齡鷄胚,提取ILTV基因組DNA進行PCR擴增.將迴收的PCR產物與pGEM-T Easy載體進行連接,轉化JM109感受態細胞,經藍白斑篩選,對菌液PCR和酶切鑒定為暘性的菌株進行測序.測序結果錶明,所剋隆的GX基因全長為950 bp,含有一箇開放閱讀框,編碼299箇氨基痠的多肽.推導的氨基痠有4箇潛在的N-糖基化位點,有11箇與二硫鍵形成有關的半胱氨痠.序列分析錶明,剋隆的ILTV-CG GX基因與GenBank中髮錶的ILTV-SA2株GX基因覈苷痠同源性為97.2%,變異點為第124位插入1箇堿基G,第136位又插入2箇堿基C,從而引起該毒株GX基因推導的氨基痠序列在第33位插人1箇亮氨痠,還存在多處氨基痠髮生變化,氨基痠同源性為95.3%.GX基因的成功剋隆為構建ILTV GX基因缺失的病毒活載體奠定基礎.
근거GenBank중수록적계전염성후기관염병독(ILTV)GX기인핵감산서렬,설계병합성료1대인물,응용PCR기술확증ILTV하남주(ILTV-CG)GX기인.장ILTV-CG접충10일령계배,제취ILTV기인조DNA진행PCR확증.장회수적PCR산물여pGEM-T Easy재체진행련접,전화JM109감수태세포,경람백반사선,대균액PCR화매절감정위양성적균주진행측서.측서결과표명,소극륭적GX기인전장위950 bp,함유일개개방열독광,편마299개안기산적다태.추도적안기산유4개잠재적N-당기화위점,유11개여이류건형성유관적반광안산.서렬분석표명,극륭적ILTV-CG GX기인여GenBank중발표적ILTV-SA2주GX기인핵감산동원성위97.2%,변이점위제124위삽입1개감기G,제136위우삽입2개감기C,종이인기해독주GX기인추도적안기산서렬재제33위삽인1개량안산,환존재다처안기산발생변화,안기산동원성위95.3%.GX기인적성공극륭위구건ILTV GX기인결실적병독활재체전정기출.
