生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2006年
2期
220-225
,共6页
王雅梅%刘冰%孙丽翠%闫豫东%司杨%祁雅慧
王雅梅%劉冰%孫麗翠%閆豫東%司楊%祁雅慧
왕아매%류빙%손려취%염예동%사양%기아혜
血管内皮细胞生长因子%真核表达载体%基因表达%心肌梗死
血管內皮細胞生長因子%真覈錶達載體%基因錶達%心肌梗死
혈관내피세포생장인자%진핵표체재체%기인표체%심기경사
构建人血管内皮细胞生长因子(VEGF165)真核表达载体,并研究其在细胞水平和大鼠急性心肌梗死动物模型中的表达.利用RT-PCR方法,从人扁桃体组织中扩增人VEGF165基因,构建真核表达载体pcDNA/V.应用脂质体介导的基因转移技术,将pcDNA/V转染至人胚肾细胞(293细胞)中,经G418筛选获得稳定表达的重组质粒细胞克隆.ELISA、Western blot检测证实重组质粒pcDNA/V能在293细胞中高效表达外源VEGF基因,鸡胚绒毛尿囊膜血管生成实验证实表达产物具有促血管生成的活性.进一步的体内表达研究,建立大鼠急性心肌梗死模型,将重组质粒pcDNA/V、空质粒pcDNA3.1(+)分三点注射于梗死交界处心肌内,四周后取材.经免疫组化染色检测,pcDNA/V组在梗死交界区有VEGF阳性表达;电镜观察显示,pcDNA/V组在梗死交界处心肌细胞间有大量毛细血管内皮细胞增生.实验结果表明:成功克隆了人VEGF165基因,构建了其真核表达载体.体内、外表达研究证实重组质粒的表达产物具有促血管生成的生物学活性,为VEGF基因治疗缺血性心肌病的研究提供实验基础.
構建人血管內皮細胞生長因子(VEGF165)真覈錶達載體,併研究其在細胞水平和大鼠急性心肌梗死動物模型中的錶達.利用RT-PCR方法,從人扁桃體組織中擴增人VEGF165基因,構建真覈錶達載體pcDNA/V.應用脂質體介導的基因轉移技術,將pcDNA/V轉染至人胚腎細胞(293細胞)中,經G418篩選穫得穩定錶達的重組質粒細胞剋隆.ELISA、Western blot檢測證實重組質粒pcDNA/V能在293細胞中高效錶達外源VEGF基因,鷄胚絨毛尿囊膜血管生成實驗證實錶達產物具有促血管生成的活性.進一步的體內錶達研究,建立大鼠急性心肌梗死模型,將重組質粒pcDNA/V、空質粒pcDNA3.1(+)分三點註射于梗死交界處心肌內,四週後取材.經免疫組化染色檢測,pcDNA/V組在梗死交界區有VEGF暘性錶達;電鏡觀察顯示,pcDNA/V組在梗死交界處心肌細胞間有大量毛細血管內皮細胞增生.實驗結果錶明:成功剋隆瞭人VEGF165基因,構建瞭其真覈錶達載體.體內、外錶達研究證實重組質粒的錶達產物具有促血管生成的生物學活性,為VEGF基因治療缺血性心肌病的研究提供實驗基礎.
구건인혈관내피세포생장인자(VEGF165)진핵표체재체,병연구기재세포수평화대서급성심기경사동물모형중적표체.이용RT-PCR방법,종인편도체조직중확증인VEGF165기인,구건진핵표체재체pcDNA/V.응용지질체개도적기인전이기술,장pcDNA/V전염지인배신세포(293세포)중,경G418사선획득은정표체적중조질립세포극륭.ELISA、Western blot검측증실중조질립pcDNA/V능재293세포중고효표체외원VEGF기인,계배융모뇨낭막혈관생성실험증실표체산물구유촉혈관생성적활성.진일보적체내표체연구,건립대서급성심기경사모형,장중조질립pcDNA/V、공질립pcDNA3.1(+)분삼점주사우경사교계처심기내,사주후취재.경면역조화염색검측,pcDNA/V조재경사교계구유VEGF양성표체;전경관찰현시,pcDNA/V조재경사교계처심기세포간유대량모세혈관내피세포증생.실험결과표명:성공극륭료인VEGF165기인,구건료기진핵표체재체.체내、외표체연구증실중조질립적표체산물구유촉혈관생성적생물학활성,위VEGF기인치료결혈성심기병적연구제공실험기출.
