检验检疫科学
檢驗檢疫科學
검험검역과학
INSPECTION AND QUARANTINE SCIENCE
2005年
6期
22-25
,共4页
张利峰%张鹤晓%乔卫虹%吴丹%高小博%杨伟%王莉%夏春
張利峰%張鶴曉%喬衛虹%吳丹%高小博%楊偉%王莉%夏春
장리봉%장학효%교위홍%오단%고소박%양위%왕리%하춘
荧光RT-PCR%鲤春病毒血症%鲤春病毒血症病毒
熒光RT-PCR%鯉春病毒血癥%鯉春病毒血癥病毒
형광RT-PCR%리춘병독혈증%리춘병독혈증병독
本研究根据鲤春病毒血症病毒的核酸保守区序列,开发、设计多条引物和探针序列,从中筛选敏感、特异的引物、探针,在循环参数、病毒核酸提取方法及逆转录条件优化的基础上,建立了快速的检测鲤春病病毒的荧光RT-PCR检测技术.同时,又将该方法与一步法RT-PCR方法和细胞查毒方法进行了互相验证和对比研究,结果表明,荧光RT-PCR方法检测病毒悬液的灵敏度最高,病毒悬液10-6稀释仍然可以检出,而细胞分离病毒方法测得的TCID50为10-4.本文还对北京地区出口渔场送检样品、人工实验感染该病毒鱼的病料进行了组织脏器中病毒分布和病毒含量的研究.结果显示,北京地区出口渔场送检样品未见细胞病变,所有检测样品均为阴性;病毒致死鱼的肠道病毒含量最高,肠组织研磨稀释10-4倍仍然可以检出;其次是肾和鳃组织,检出极限为稀释10-3倍组织悬液;肉和脑组织中病毒含量较低,肉最高能检出10-2倍组织悬液,而脑组织只能检出10-1倍组织稀释液.
本研究根據鯉春病毒血癥病毒的覈痠保守區序列,開髮、設計多條引物和探針序列,從中篩選敏感、特異的引物、探針,在循環參數、病毒覈痠提取方法及逆轉錄條件優化的基礎上,建立瞭快速的檢測鯉春病病毒的熒光RT-PCR檢測技術.同時,又將該方法與一步法RT-PCR方法和細胞查毒方法進行瞭互相驗證和對比研究,結果錶明,熒光RT-PCR方法檢測病毒懸液的靈敏度最高,病毒懸液10-6稀釋仍然可以檢齣,而細胞分離病毒方法測得的TCID50為10-4.本文還對北京地區齣口漁場送檢樣品、人工實驗感染該病毒魚的病料進行瞭組織髒器中病毒分佈和病毒含量的研究.結果顯示,北京地區齣口漁場送檢樣品未見細胞病變,所有檢測樣品均為陰性;病毒緻死魚的腸道病毒含量最高,腸組織研磨稀釋10-4倍仍然可以檢齣;其次是腎和鰓組織,檢齣極限為稀釋10-3倍組織懸液;肉和腦組織中病毒含量較低,肉最高能檢齣10-2倍組織懸液,而腦組織隻能檢齣10-1倍組織稀釋液.
본연구근거리춘병독혈증병독적핵산보수구서렬,개발、설계다조인물화탐침서렬,종중사선민감、특이적인물、탐침,재순배삼수、병독핵산제취방법급역전록조건우화적기출상,건립료쾌속적검측리춘병병독적형광RT-PCR검측기술.동시,우장해방법여일보법RT-PCR방법화세포사독방법진행료호상험증화대비연구,결과표명,형광RT-PCR방법검측병독현액적령민도최고,병독현액10-6희석잉연가이검출,이세포분리병독방법측득적TCID50위10-4.본문환대북경지구출구어장송검양품、인공실험감염해병독어적병료진행료조직장기중병독분포화병독함량적연구.결과현시,북경지구출구어장송검양품미견세포병변,소유검측양품균위음성;병독치사어적장도병독함량최고,장조직연마희석10-4배잉연가이검출;기차시신화새조직,검출겁한위희석10-3배조직현액;육화뇌조직중병독함량교저,육최고능검출10-2배조직현액,이뇌조직지능검출10-1배조직희석액.
