病毒学报
病毒學報
병독학보
CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
2005年
3期
204-209
,共6页
高凯%赵爱志%吴小兵%药力波%张英起%王军志
高凱%趙愛誌%吳小兵%藥力波%張英起%王軍誌
고개%조애지%오소병%약력파%장영기%왕군지
腺相关病毒%基因治疗%肿瘤坏死因子%生物学活性%类风湿性关节炎
腺相關病毒%基因治療%腫瘤壞死因子%生物學活性%類風濕性關節炎
선상관병독%기인치료%종류배사인자%생물학활성%류풍습성관절염
为研究腺相关病毒2型载体应用于类风湿性关节炎进行基因治疗的可行性,首先构建携带人肿瘤坏死因子Ⅱ型受体胞外区和人免疫球蛋白IgG1 Fc段融合基因的重组2型腺相关病毒(FAAV2/hTNFR:Fc),并对其生物学活性进行研究.以RT-PCR分别从U937和人淋巴细胞总RNA中扩增人肿瘤坏死因子Ⅱ型受体胞外区和人免疫球蛋白IgG1 Fc段基因,并以重叠延伸PCR的方法将二者融合后克隆入pSNAV1载体质粒进行重组病毒生产,在进行重组病毒理化分析后,以TNFα细胞毒中和试验来研究该重组病毒的生物学活性.结果显示:所构建的重组病毒rAAV2/hTNFR:Fc基因结构与预期一致;病毒在体外感染BHK-21细胞后,含TNFR:Fc融合蛋白的表达上清可以有效中和人、大鼠、小鼠TNFα对L929的细胞毒性.所研究构建的重组腺相关病毒可以用来作为阻断TNFα的手段,进行类风湿性关节炎的基因治疗研究.
為研究腺相關病毒2型載體應用于類風濕性關節炎進行基因治療的可行性,首先構建攜帶人腫瘤壞死因子Ⅱ型受體胞外區和人免疫毬蛋白IgG1 Fc段融閤基因的重組2型腺相關病毒(FAAV2/hTNFR:Fc),併對其生物學活性進行研究.以RT-PCR分彆從U937和人淋巴細胞總RNA中擴增人腫瘤壞死因子Ⅱ型受體胞外區和人免疫毬蛋白IgG1 Fc段基因,併以重疊延伸PCR的方法將二者融閤後剋隆入pSNAV1載體質粒進行重組病毒生產,在進行重組病毒理化分析後,以TNFα細胞毒中和試驗來研究該重組病毒的生物學活性.結果顯示:所構建的重組病毒rAAV2/hTNFR:Fc基因結構與預期一緻;病毒在體外感染BHK-21細胞後,含TNFR:Fc融閤蛋白的錶達上清可以有效中和人、大鼠、小鼠TNFα對L929的細胞毒性.所研究構建的重組腺相關病毒可以用來作為阻斷TNFα的手段,進行類風濕性關節炎的基因治療研究.
위연구선상관병독2형재체응용우류풍습성관절염진행기인치료적가행성,수선구건휴대인종류배사인자Ⅱ형수체포외구화인면역구단백IgG1 Fc단융합기인적중조2형선상관병독(FAAV2/hTNFR:Fc),병대기생물학활성진행연구.이RT-PCR분별종U937화인림파세포총RNA중확증인종류배사인자Ⅱ형수체포외구화인면역구단백IgG1 Fc단기인,병이중첩연신PCR적방법장이자융합후극륭입pSNAV1재체질립진행중조병독생산,재진행중조병독이화분석후,이TNFα세포독중화시험래연구해중조병독적생물학활성.결과현시:소구건적중조병독rAAV2/hTNFR:Fc기인결구여예기일치;병독재체외감염BHK-21세포후,함TNFR:Fc융합단백적표체상청가이유효중화인、대서、소서TNFα대L929적세포독성.소연구구건적중조선상관병독가이용래작위조단TNFα적수단,진행류풍습성관절염적기인치료연구.
