动物学报
動物學報
동물학보
ACTA ZOOLOGICA SINICA
2001年
4期
419-424
,共6页
陈云%刘喆%彭景%张富春%陈幼珍%王宾
陳雲%劉喆%彭景%張富春%陳幼珍%王賓
진운%류철%팽경%장부춘%진유진%왕빈
恒河猴CGβDNA疫苗HeLa细胞表达免疫
恆河猴CGβDNA疫苗HeLa細胞錶達免疫
항하후CGβDNA역묘HeLa세포표체면역
为了探讨人绒毛膜促性腺激素hCGβ亚基DNA避孕疫苗的可能性,以恒河猴绒毛膜促性腺激素rrmCGβ亚基全长氨基酸编码序列的cDNA片段构建了真核质粒表达载体pCMV4-rmCGβ.通过脂质体转染的方法导入HeLa细胞,采用RT-PCR方法检测rmCGβ在mRNA水平上的表达.实验证明HeLa细胞在转染后24 h表达最强,48 h和72 h表达依次减弱;利用ELISA方法检测了pCMV4-rmCGβ在HeLa细胞中rmCGβ蛋白的表达,mCGβ蛋白主要以细胞内或膜结合的形式存在,其含量可达0.5μg/106细胞.pCMV4-mCGβ DNA免疫接种雌性BALB/c纯系小鼠,能诱导小鼠产生强烈的体液免疫应答,滴度最高可达1:6000以上,高滴度的免疫反应持续10周以上,且免疫反应的强度与pCMV4-mCGβ DNA无剂量依赖关系.
為瞭探討人絨毛膜促性腺激素hCGβ亞基DNA避孕疫苗的可能性,以恆河猴絨毛膜促性腺激素rrmCGβ亞基全長氨基痠編碼序列的cDNA片段構建瞭真覈質粒錶達載體pCMV4-rmCGβ.通過脂質體轉染的方法導入HeLa細胞,採用RT-PCR方法檢測rmCGβ在mRNA水平上的錶達.實驗證明HeLa細胞在轉染後24 h錶達最彊,48 h和72 h錶達依次減弱;利用ELISA方法檢測瞭pCMV4-rmCGβ在HeLa細胞中rmCGβ蛋白的錶達,mCGβ蛋白主要以細胞內或膜結閤的形式存在,其含量可達0.5μg/106細胞.pCMV4-mCGβ DNA免疫接種雌性BALB/c純繫小鼠,能誘導小鼠產生彊烈的體液免疫應答,滴度最高可達1:6000以上,高滴度的免疫反應持續10週以上,且免疫反應的彊度與pCMV4-mCGβ DNA無劑量依賴關繫.
위료탐토인융모막촉성선격소hCGβ아기DNA피잉역묘적가능성,이항하후융모막촉성선격소rrmCGβ아기전장안기산편마서렬적cDNA편단구건료진핵질립표체재체pCMV4-rmCGβ.통과지질체전염적방법도입HeLa세포,채용RT-PCR방법검측rmCGβ재mRNA수평상적표체.실험증명HeLa세포재전염후24 h표체최강,48 h화72 h표체의차감약;이용ELISA방법검측료pCMV4-rmCGβ재HeLa세포중rmCGβ단백적표체,mCGβ단백주요이세포내혹막결합적형식존재,기함량가체0.5μg/106세포.pCMV4-mCGβ DNA면역접충자성BALB/c순계소서,능유도소서산생강렬적체액면역응답,적도최고가체1:6000이상,고적도적면역반응지속10주이상,차면역반응적강도여pCMV4-mCGβ DNA무제량의뢰관계.
