CAJ | 학술논문

应用基因搭桥法及Taq酶聚合反应合成了编码人血管内皮生长因子受体-Ⅱ(hVEGFR-Ⅱ, KDR)第502～764位262个氨基酸的基因片段.DNA序列分析表明,合成的786 bp的基因片段与文献报道的KDR相应cDNA序列完全一致.将该基因与原核融合蛋白表达载体pGEX-3X重组,在大肠杆菌JM109中表达了GST-KDR262融合蛋白,表达量约占菌体总蛋白的35%.表达产物依次经包涵体分离、变性、复性、亲合层析纯化和Xa因子酶解,获得了KDR262目的蛋白纯品.GST-KDR262融合蛋白和纯化产物经Western blot分析,两者均可被VEGF165特异性识别,前者分子量约56 kD,后者分子量约30 kD;这两种蛋白用VEGF165及其抗体进行的ELISA分析结果均显示阳性,并有剂量依赖关系,而用Xa因子酶解GST-KDR262融合蛋白获得的GST和空载体诱导产物对照均为阴性.以上结果表明表达的KDR262蛋白可特异性地与VEGF结合.
응용기인탑교법급Taq매취합반응합성료편마인혈관내피생장인자수체-Ⅱ(hVEGFR-Ⅱ, KDR)제502～764위262개안기산적기인편단.DNA서렬분석표명,합성적786 bp적기인편단여문헌보도적KDR상응cDNA서렬완전일치.장해기인여원핵융합단백표체재체pGEX-3X중조,재대장간균JM109중표체료GST-KDR262융합단백,표체량약점균체총단백적35%.표체산물의차경포함체분리、변성、복성、친합층석순화화Xa인자매해,획득료KDR262목적단백순품.GST-KDR262융합단백화순화산물경Western blot분석,량자균가피VEGF165특이성식별,전자분자량약56 kD,후자분자량약30 kD;저량충단백용VEGF165급기항체진행적ELISA분석결과균현시양성,병유제량의뢰관계,이용Xa인자매해GST-KDR262융합단백획득적GST화공재체유도산물대조균위음성.이상결과표명표체적KDR262단백가특이성지여VEGF결합.