遗传学报
遺傳學報
유전학보
ACTA GENETICA SINICA
2002年
2期
175-180
,共6页
李荣%王冀姝%孙强%王键%杨曦%黄红燕%周鹏%韩骅
李榮%王冀姝%孫彊%王鍵%楊晞%黃紅燕%週鵬%韓驊
리영%왕기주%손강%왕건%양희%황홍연%주붕%한화
LIM蛋白%KyoT%PIAS1%酵母双杂交
LIM蛋白%KyoT%PIAS1%酵母雙雜交
LIM단백%KyoT%PIAS1%효모쌍잡교
KyoT为LIM结构域蛋白,可与转录因子RBP-Jk相互作用.为了研究其功能,用酵母双杂交法筛选了与KyoT相互作用的蛋白.以KyoT2为诱饵筛选人淋巴结cDNA文库,从5×106个克隆中共获得42个阳性克隆.提取质粒进行酶切鉴定,获得22个非重复克隆.对此22个克隆进行序列分析,共获得13种基因,其中包括已知的KyoT相互作用蛋白RBP-Jk和两个未知基因.另一种被筛选到的已知基因是激活状态的信号转导物和转录因子1活化物的抑制蛋白(protein inhibitor of activated signal transducer and activator of transcription 1,PIAS1).由于KyoT在小鼠睾丸中表达较高,因此进一步探讨了KyoT2与PIAS1的相互作用.并首先在酵母中证实KyoT2与PIAS1的相互作用并得到阳性结果.进而在大肠杆菌中表达纯化了KyoT2蛋白,并以此为抗原制备了抗KyoT2多克隆抗体,再用GST-pull down实验验证了KyoT2和PIAS1在体外的相互作用.成功筛选了KyoT相互作用蛋白,发现并验证了KyoT与PIAS1的相互作用,对探讨KyoT的功能具有重要意义.
KyoT為LIM結構域蛋白,可與轉錄因子RBP-Jk相互作用.為瞭研究其功能,用酵母雙雜交法篩選瞭與KyoT相互作用的蛋白.以KyoT2為誘餌篩選人淋巴結cDNA文庫,從5×106箇剋隆中共穫得42箇暘性剋隆.提取質粒進行酶切鑒定,穫得22箇非重複剋隆.對此22箇剋隆進行序列分析,共穫得13種基因,其中包括已知的KyoT相互作用蛋白RBP-Jk和兩箇未知基因.另一種被篩選到的已知基因是激活狀態的信號轉導物和轉錄因子1活化物的抑製蛋白(protein inhibitor of activated signal transducer and activator of transcription 1,PIAS1).由于KyoT在小鼠睪汍中錶達較高,因此進一步探討瞭KyoT2與PIAS1的相互作用.併首先在酵母中證實KyoT2與PIAS1的相互作用併得到暘性結果.進而在大腸桿菌中錶達純化瞭KyoT2蛋白,併以此為抗原製備瞭抗KyoT2多剋隆抗體,再用GST-pull down實驗驗證瞭KyoT2和PIAS1在體外的相互作用.成功篩選瞭KyoT相互作用蛋白,髮現併驗證瞭KyoT與PIAS1的相互作用,對探討KyoT的功能具有重要意義.
KyoT위LIM결구역단백,가여전록인자RBP-Jk상호작용.위료연구기공능,용효모쌍잡교법사선료여KyoT상호작용적단백.이KyoT2위유이사선인림파결cDNA문고,종5×106개극륭중공획득42개양성극륭.제취질립진행매절감정,획득22개비중복극륭.대차22개극륭진행서렬분석,공획득13충기인,기중포괄이지적KyoT상호작용단백RBP-Jk화량개미지기인.령일충피사선도적이지기인시격활상태적신호전도물화전록인자1활화물적억제단백(protein inhibitor of activated signal transducer and activator of transcription 1,PIAS1).유우KyoT재소서고환중표체교고,인차진일보탐토료KyoT2여PIAS1적상호작용.병수선재효모중증실KyoT2여PIAS1적상호작용병득도양성결과.진이재대장간균중표체순화료KyoT2단백,병이차위항원제비료항KyoT2다극륭항체,재용GST-pull down실험험증료KyoT2화PIAS1재체외적상호작용.성공사선료KyoT상호작용단백,발현병험증료KyoT여PIAS1적상호작용,대탐토KyoT적공능구유중요의의.
