癌症
癌癥
암증
CHINESE JOURNAL OF CANCER
2002年
1期
33-38
,共6页
桂黎明%魏丽惠%张颖妹%王建六%王应%陈英%马大龙
桂黎明%魏麗惠%張穎妹%王建六%王應%陳英%馬大龍
계려명%위려혜%장영매%왕건륙%왕응%진영%마대룡
ras基因%致瘤作用%Raf信号通路%转化
ras基因%緻瘤作用%Raf信號通路%轉化
ras기인%치류작용%Raf신호통로%전화
背景与目的:有资料提示 K-ras基因突变可能与子宫内膜癌的发生有关.本研究在发现子宫内膜腺癌 HEC-1A细胞有 K-ras基因第 12密码子突变的基础上,探讨 [12Asp]K-ras4B突变基因的致瘤性及其发生机制.方法:(1)用 RT-PCR方法扩增 [12Asp]K-ras4B基因全长 cDNA,将此 cDNA插入真核表达载体 pcDI,构建 pcDI-[12Asp]K-ras4B真核表达质粒 ;(2)观察真核表达质粒 pcDI-[12Asp]K-ras4B转染前后细胞形态学改变,用 MTT方法、 3H掺入实验、集落形成实验检测转染前后细胞体外生长的变化,以及用转基因肿瘤细胞裸鼠异种接种成瘤实验,了解 [12Asp]K-ras4B的致瘤作用.结果:(1)成功构建了真核表达质粒 pcDI-[12Asp]K-ras4B.(2)通过转染前后细胞形态学变化、体外增殖变化、软琼脂集落形成实验以及裸鼠皮下转染细胞接种实验,证明 [12Asp]K-ras4B基因具有致瘤作用.(3)将 pCMV-RasN17质粒转染到 pcDI-[12Asp]K-ras4B细胞,与未转染细胞比较,发现 pcDI-[12Asp]K-ras4B细胞增生受到明显抑制.(4)分别将 pCMV-RafS621A和 pCMV-RafCAAX质粒转染到 pcDI-[12Asp]K-ras4B NIH3T3细胞,与未转染的细胞比较,转染 pCMV-RafS621A质粒的 pcDI-[12Asp]K-ras4B细胞增殖受到抑制,与对照组比较差异显著(P< 0.05); 转染 pCMV-RafCAAX质粒的 pcDI-[12Asp]K-ras4B细胞增殖活性加强,与对照组比较差异显著(P< 0.05). 结论:(1)[12Asp]K-ras4B基因单独作用即可诱导 NIH3T3细胞瘤样转化 ;(2)[12Asp]K-ras4B基因诱导的 NIH3T3细胞瘤样转化是通过下游的 Raf信号通路.
揹景與目的:有資料提示 K-ras基因突變可能與子宮內膜癌的髮生有關.本研究在髮現子宮內膜腺癌 HEC-1A細胞有 K-ras基因第 12密碼子突變的基礎上,探討 [12Asp]K-ras4B突變基因的緻瘤性及其髮生機製.方法:(1)用 RT-PCR方法擴增 [12Asp]K-ras4B基因全長 cDNA,將此 cDNA插入真覈錶達載體 pcDI,構建 pcDI-[12Asp]K-ras4B真覈錶達質粒 ;(2)觀察真覈錶達質粒 pcDI-[12Asp]K-ras4B轉染前後細胞形態學改變,用 MTT方法、 3H摻入實驗、集落形成實驗檢測轉染前後細胞體外生長的變化,以及用轉基因腫瘤細胞裸鼠異種接種成瘤實驗,瞭解 [12Asp]K-ras4B的緻瘤作用.結果:(1)成功構建瞭真覈錶達質粒 pcDI-[12Asp]K-ras4B.(2)通過轉染前後細胞形態學變化、體外增殖變化、軟瓊脂集落形成實驗以及裸鼠皮下轉染細胞接種實驗,證明 [12Asp]K-ras4B基因具有緻瘤作用.(3)將 pCMV-RasN17質粒轉染到 pcDI-[12Asp]K-ras4B細胞,與未轉染細胞比較,髮現 pcDI-[12Asp]K-ras4B細胞增生受到明顯抑製.(4)分彆將 pCMV-RafS621A和 pCMV-RafCAAX質粒轉染到 pcDI-[12Asp]K-ras4B NIH3T3細胞,與未轉染的細胞比較,轉染 pCMV-RafS621A質粒的 pcDI-[12Asp]K-ras4B細胞增殖受到抑製,與對照組比較差異顯著(P< 0.05); 轉染 pCMV-RafCAAX質粒的 pcDI-[12Asp]K-ras4B細胞增殖活性加彊,與對照組比較差異顯著(P< 0.05). 結論:(1)[12Asp]K-ras4B基因單獨作用即可誘導 NIH3T3細胞瘤樣轉化 ;(2)[12Asp]K-ras4B基因誘導的 NIH3T3細胞瘤樣轉化是通過下遊的 Raf信號通路.
배경여목적:유자료제시 K-ras기인돌변가능여자궁내막암적발생유관.본연구재발현자궁내막선암 HEC-1A세포유 K-ras기인제 12밀마자돌변적기출상,탐토 [12Asp]K-ras4B돌변기인적치류성급기발생궤제.방법:(1)용 RT-PCR방법확증 [12Asp]K-ras4B기인전장 cDNA,장차 cDNA삽입진핵표체재체 pcDI,구건 pcDI-[12Asp]K-ras4B진핵표체질립 ;(2)관찰진핵표체질립 pcDI-[12Asp]K-ras4B전염전후세포형태학개변,용 MTT방법、 3H참입실험、집락형성실험검측전염전후세포체외생장적변화,이급용전기인종류세포라서이충접충성류실험,료해 [12Asp]K-ras4B적치류작용.결과:(1)성공구건료진핵표체질립 pcDI-[12Asp]K-ras4B.(2)통과전염전후세포형태학변화、체외증식변화、연경지집락형성실험이급라서피하전염세포접충실험,증명 [12Asp]K-ras4B기인구유치류작용.(3)장 pCMV-RasN17질립전염도 pcDI-[12Asp]K-ras4B세포,여미전염세포비교,발현 pcDI-[12Asp]K-ras4B세포증생수도명현억제.(4)분별장 pCMV-RafS621A화 pCMV-RafCAAX질립전염도 pcDI-[12Asp]K-ras4B NIH3T3세포,여미전염적세포비교,전염 pCMV-RafS621A질립적 pcDI-[12Asp]K-ras4B세포증식수도억제,여대조조비교차이현저(P< 0.05); 전염 pCMV-RafCAAX질립적 pcDI-[12Asp]K-ras4B세포증식활성가강,여대조조비교차이현저(P< 0.05). 결론:(1)[12Asp]K-ras4B기인단독작용즉가유도 NIH3T3세포류양전화 ;(2)[12Asp]K-ras4B기인유도적 NIH3T3세포류양전화시통과하유적 Raf신호통로.
