中国兽医学报
中國獸醫學報
중국수의학보
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE
2000年
1期
10-14
,共5页
孙明%涂长春%李红卫%高显明%何旭玉%白晓鸿%余兴龙%殷震
孫明%塗長春%李紅衛%高顯明%何旭玉%白曉鴻%餘興龍%慇震
손명%도장춘%리홍위%고현명%하욱옥%백효홍%여흥룡%은진
JEV%PPV%PRRSV%PRV%多联PCR%引物设计
JEV%PPV%PRRSV%PRV%多聯PCR%引物設計
JEV%PPV%PRRSV%PRV%다련PCR%인물설계
首先在GenBank查出日本乙型脑炎病毒(JEV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸系统综合征病毒(PRRSV)和猪细小病毒(PPV)基因组的所有已知序列,对各病毒基因区域进行同源性分析,结合各病毒基因组的结构特点,发现并确定了PRV的gH基因区、JEV的多聚蛋白基因区、PRRSV的结构蛋白区和PPV的VP2基因区为各自病毒保守序列.利用Goldkey软件对上述保守的特殊序列进行引物设计,要求G+C含量47%～60% ,长度18～25 bp,Tm值72～85之间.对设计出的4种病毒引物再用VNTI30软件进行引物之间二级结构分析,以避免引物之间形成稳定的结构二聚体.选出扩增片段分别为PRV 125 bp、 PRRSV 263 bp、PPV 313 bp、JEV 375 bp的4对引物,并进行了每对引物扩增片段序列的同源性分析或互补性分析,以避免它们之间具有过高的同源性.最终确定了这4种病毒的多联PCR 引物,从而为建立这4种病毒的多联PCR方法奠定了基础.
首先在GenBank查齣日本乙型腦炎病毒(JEV)、偽狂犬病病毒(PRV)、豬繁殖與呼吸繫統綜閤徵病毒(PRRSV)和豬細小病毒(PPV)基因組的所有已知序列,對各病毒基因區域進行同源性分析,結閤各病毒基因組的結構特點,髮現併確定瞭PRV的gH基因區、JEV的多聚蛋白基因區、PRRSV的結構蛋白區和PPV的VP2基因區為各自病毒保守序列.利用Goldkey軟件對上述保守的特殊序列進行引物設計,要求G+C含量47%～60% ,長度18～25 bp,Tm值72～85之間.對設計齣的4種病毒引物再用VNTI30軟件進行引物之間二級結構分析,以避免引物之間形成穩定的結構二聚體.選齣擴增片段分彆為PRV 125 bp、 PRRSV 263 bp、PPV 313 bp、JEV 375 bp的4對引物,併進行瞭每對引物擴增片段序列的同源性分析或互補性分析,以避免它們之間具有過高的同源性.最終確定瞭這4種病毒的多聯PCR 引物,從而為建立這4種病毒的多聯PCR方法奠定瞭基礎.
수선재GenBank사출일본을형뇌염병독(JEV)、위광견병병독(PRV)、저번식여호흡계통종합정병독(PRRSV)화저세소병독(PPV)기인조적소유이지서렬,대각병독기인구역진행동원성분석,결합각병독기인조적결구특점,발현병학정료PRV적gH기인구、JEV적다취단백기인구、PRRSV적결구단백구화PPV적VP2기인구위각자병독보수서렬.이용Goldkey연건대상술보수적특수서렬진행인물설계,요구G+C함량47%～60% ,장도18～25 bp,Tm치72～85지간.대설계출적4충병독인물재용VNTI30연건진행인물지간이급결구분석,이피면인물지간형성은정적결구이취체.선출확증편단분별위PRV 125 bp、 PRRSV 263 bp、PPV 313 bp、JEV 375 bp적4대인물,병진행료매대인물확증편단서렬적동원성분석혹호보성분석,이피면타문지간구유과고적동원성.최종학정료저4충병독적다련PCR 인물,종이위건립저4충병독적다련PCR방법전정료기출.
