现代消化及介入诊疗
現代消化及介入診療
현대소화급개입진료
MODERN DIGESTION & INTERVENTION
2004年
3期
143-145,183
,共4页
朱惠明%杨俊文%王娜%蔡筱彦%邓传珍
硃惠明%楊俊文%王娜%蔡篠彥%鄧傳珍
주혜명%양준문%왕나%채소언%산전진
凋亡素%真核表达载体%Kozak序列
凋亡素%真覈錶達載體%Kozak序列
조망소%진핵표체재체%Kozak서렬
目的构建携带Kozak序列的重组凋亡素基因VP3表达载体,为提高凋亡素基因在肿瘤细胞中的表达效率,增强其诱导肿瘤细胞凋亡的生物学活性奠定实验基础.方法通过两次PCR,以pcDNA-VP3质粒为模板,扩增出带Kozak序列(真核核糖体结合位点)的凋亡素基因VP3.将其克隆到真核表达载体pRevTRE的多克隆位点,构建重组凋亡素的真核表达载体pRevTRE-VP3,将该重组表达载体分别以限制性内切酶BamHI和XhoI进行酶切鉴定,进一步将初步鉴定显示插入目的基因的质粒进行测序鉴定.结果测序结果表明,本研究合成的凋亡素基因与Noteborn报告的凋亡素基因序列一致,同源性为100%.在其起始密码子前添加了Kozak序列的凋亡素基因已成功克隆到真核表达载体pRevTRE.结论采用两次PCR法可将提高表达效率的真核核糖体结合位点添加到凋亡素基因序列起始密码子前端,并构建成凋亡素真核表达载体.
目的構建攜帶Kozak序列的重組凋亡素基因VP3錶達載體,為提高凋亡素基因在腫瘤細胞中的錶達效率,增彊其誘導腫瘤細胞凋亡的生物學活性奠定實驗基礎.方法通過兩次PCR,以pcDNA-VP3質粒為模闆,擴增齣帶Kozak序列(真覈覈糖體結閤位點)的凋亡素基因VP3.將其剋隆到真覈錶達載體pRevTRE的多剋隆位點,構建重組凋亡素的真覈錶達載體pRevTRE-VP3,將該重組錶達載體分彆以限製性內切酶BamHI和XhoI進行酶切鑒定,進一步將初步鑒定顯示插入目的基因的質粒進行測序鑒定.結果測序結果錶明,本研究閤成的凋亡素基因與Noteborn報告的凋亡素基因序列一緻,同源性為100%.在其起始密碼子前添加瞭Kozak序列的凋亡素基因已成功剋隆到真覈錶達載體pRevTRE.結論採用兩次PCR法可將提高錶達效率的真覈覈糖體結閤位點添加到凋亡素基因序列起始密碼子前耑,併構建成凋亡素真覈錶達載體.
목적구건휴대Kozak서렬적중조조망소기인VP3표체재체,위제고조망소기인재종류세포중적표체효솔,증강기유도종류세포조망적생물학활성전정실험기출.방법통과량차PCR,이pcDNA-VP3질립위모판,확증출대Kozak서렬(진핵핵당체결합위점)적조망소기인VP3.장기극륭도진핵표체재체pRevTRE적다극륭위점,구건중조조망소적진핵표체재체pRevTRE-VP3,장해중조표체재체분별이한제성내절매BamHI화XhoI진행매절감정,진일보장초보감정현시삽입목적기인적질립진행측서감정.결과측서결과표명,본연구합성적조망소기인여Noteborn보고적조망소기인서렬일치,동원성위100%.재기기시밀마자전첨가료Kozak서렬적조망소기인이성공극륭도진핵표체재체pRevTRE.결론채용량차PCR법가장제고표체효솔적진핵핵당체결합위점첨가도조망소기인서렬기시밀마자전단,병구건성조망소진핵표체재체.
