含有鸡体偏嗜性密码子的H5亚型禽流感病毒HA基因的优化构建及其DNA疫苗体外瞬时表达研究
함유계체편기성밀마자적H5아형금류감병독HA기인적우화구건급기DNA역묘체외순시표체연구
Construction of codon optimized H5 avian influenza HA gene with chicken bias codons and in vitro expression of its DNA vaccine
  • 万方数据
    中国预防兽医学报 중국예방수의학보
    CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
    2005年 6期 441-444,449 ,共5页

    姜永萍%李呈军%张洪波%步志高%张芳芳%邓国华%于康震%陈化兰

    강영평%리정군%장홍파%보지고%장방방%산국화%우강진%진화란

    HA基因%密码子优化%重叠延伸PCR%间接免疫荧光%Westernblot检测 HA基因%密碼子優化%重疊延伸PCR%間接免疫熒光%Westernblot檢測
    HA기인%밀마자우화%중첩연신PCR%간접면역형광%Westernblot검측
    不同物种间细胞在蛋白翻译过程中具有密码子使用的偏嗜性,鸡与A型流感病毒的密码子使用频率存在着明显差异.为此,利用寡核苷酸合成、重叠延伸PCR及限制酶切法构建了密码子优化的表达A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]HA蛋白的基因optiHA5,并将其插入CMV启动子表达载体pCI构建了H5亚型DNA疫苗质粒pCIoptiHA5,将含有GD/1/96(H5N1)野生型HA基因的质粒pCIHA5和pCIoptiHA5分别转染293T细胞,间接免疫荧光检测转染后24～48h293T细胞中瞬时表达的HA抗原蛋白;Westemblot证实上述2种表达质粒均可正确表达H5亚型HA抗原蛋白,结果表明密码子优化的基因optiHA5体外瞬时表达水平显著高于野生型HA基因.这一结果为进一步开展SPF鸡免疫保护效果的比较研究奠定了基础.
    불동물충간세포재단백번역과정중구유밀마자사용적편기성,계여A형류감병독적밀마자사용빈솔존재착명현차이.위차,이용과핵감산합성、중첩연신PCR급한제매절법구건료밀마자우화적표체A/Goose/GuangDong/1/96(H5N1)[GD/1/96(H5N1)]HA단백적기인optiHA5,병장기삽입CMV계동자표체재체pCI구건료H5아형DNA역묘질립pCIoptiHA5,장함유GD/1/96(H5N1)야생형HA기인적질립pCIHA5화pCIoptiHA5분별전염293T세포,간접면역형광검측전염후24～48h293T세포중순시표체적HA항원단백;Westemblot증실상술2충표체질립균가정학표체H5아형HA항원단백,결과표명밀마자우화적기인optiHA5체외순시표체수평현저고우야생형HA기인.저일결과위진일보개전SPF계면역보호효과적비교연구전정료기출.
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