生物加工过程
生物加工過程
생물가공과정
CHINESE JOURNAL OF BIOPROCESS ENGINEERING
2009年
3期
68-72
,共5页
官兴颖%吴振芳%吴琦%胥兵%陈惠
官興穎%吳振芳%吳琦%胥兵%陳惠
관흥영%오진방%오기%서병%진혜
枯草芽孢杆菌%克隆%内切葡聚糖酶基因%表达%序列
枯草芽孢桿菌%剋隆%內切葡聚糖酶基因%錶達%序列
고초아포간균%극륭%내절포취당매기인%표체%서렬
以自行分离筛选出的天然枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) C36的染色体DNA为模板,PCR扩增得到含有内切葡聚糖酶基因的DNA片段,将其克隆到pMD18T载体中,序列分析表明,克隆得到的DNA片段全长1 602 bp,编码一个含有499个氨基酸的多肽.与其他芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因序列比对,其核苷酸同源率为90%～93%,其编码的氨基酸序列的同源性在90%～98%,已将此基因注册GenBank(DQ782954).将含内切葡聚糖酶基因的重组克隆质粒进行亚克隆,用KpnⅠ和EcoRⅠ双酶切后,与相同酶切的表达载体pET32a相连接,并导入大肠杆菌BL21中表达.蛋白质电泳实验结果表明在6.47×104处有表达蛋白带.经测定表达蛋白比酶活力达99.02 U/mL,为出发菌C36(63.78 U/mL)的1.55倍.
以自行分離篩選齣的天然枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis) C36的染色體DNA為模闆,PCR擴增得到含有內切葡聚糖酶基因的DNA片段,將其剋隆到pMD18T載體中,序列分析錶明,剋隆得到的DNA片段全長1 602 bp,編碼一箇含有499箇氨基痠的多肽.與其他芽孢桿菌內切葡聚糖酶基因序列比對,其覈苷痠同源率為90%～93%,其編碼的氨基痠序列的同源性在90%～98%,已將此基因註冊GenBank(DQ782954).將含內切葡聚糖酶基因的重組剋隆質粒進行亞剋隆,用KpnⅠ和EcoRⅠ雙酶切後,與相同酶切的錶達載體pET32a相連接,併導入大腸桿菌BL21中錶達.蛋白質電泳實驗結果錶明在6.47×104處有錶達蛋白帶.經測定錶達蛋白比酶活力達99.02 U/mL,為齣髮菌C36(63.78 U/mL)的1.55倍.
이자행분리사선출적천연고초아포간균(Bacillus subtilis) C36적염색체DNA위모판,PCR확증득도함유내절포취당매기인적DNA편단,장기극륭도pMD18T재체중,서렬분석표명,극륭득도적DNA편단전장1 602 bp,편마일개함유499개안기산적다태.여기타아포간균내절포취당매기인서렬비대,기핵감산동원솔위90%～93%,기편마적안기산서렬적동원성재90%～98%,이장차기인주책GenBank(DQ782954).장함내절포취당매기인적중조극륭질립진행아극륭,용KpnⅠ화EcoRⅠ쌍매절후,여상동매절적표체재체pET32a상련접,병도입대장간균BL21중표체.단백질전영실험결과표명재6.47×104처유표체단백대.경측정표체단백비매활력체99.02 U/mL,위출발균C36(63.78 U/mL)적1.55배.
