中国免疫学杂志
中國免疫學雜誌
중국면역학잡지
CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
2009年
7期
613-616
,共4页
胡为民%唐恩洁%敬保迁%任碧轩
鬍為民%唐恩潔%敬保遷%任碧軒
호위민%당은길%경보천%임벽헌
FTY720%1型1-磷酸鞘氨醇受体%内化%荧光显微镜
FTY720%1型1-燐痠鞘氨醇受體%內化%熒光顯微鏡
FTY720%1형1-린산초안순수체%내화%형광현미경
目的:研究FTY720诱导1型1-磷酸鞘氨醇受体(S1P1)内化与后者保守基序之间的关系.方法:以HA-S1P1(WT)-Myc-EGFP-N1融合表达载体为模板,应用重叠PCR的方法,将S1P1保守基序ERY突变为ENY,构建HA-S1P1(R142N)-Myc-EGFP-N1融合表达载体.测序鉴定后,经Polyfect转染入HEK293细胞.G418筛选出稳定细胞株.100 nmol/L FTY720处理3、6、12小时后,荧光显微镜下观察S1P1在HEK293细胞上的表达情况.结果:HA-S1P1(R142N)-Myc-EGFP-N1载体被成功构建,S1P1(WT)和S1P1(R142N)蛋白表达在HEK293稳定细胞株的表面,FTY720能诱导S1P1(WT)内化,但不能诱导S1P1(R142N)内化.结论:FTY720诱导S1P1内化与ERY保守基序有关.
目的:研究FTY720誘導1型1-燐痠鞘氨醇受體(S1P1)內化與後者保守基序之間的關繫.方法:以HA-S1P1(WT)-Myc-EGFP-N1融閤錶達載體為模闆,應用重疊PCR的方法,將S1P1保守基序ERY突變為ENY,構建HA-S1P1(R142N)-Myc-EGFP-N1融閤錶達載體.測序鑒定後,經Polyfect轉染入HEK293細胞.G418篩選齣穩定細胞株.100 nmol/L FTY720處理3、6、12小時後,熒光顯微鏡下觀察S1P1在HEK293細胞上的錶達情況.結果:HA-S1P1(R142N)-Myc-EGFP-N1載體被成功構建,S1P1(WT)和S1P1(R142N)蛋白錶達在HEK293穩定細胞株的錶麵,FTY720能誘導S1P1(WT)內化,但不能誘導S1P1(R142N)內化.結論:FTY720誘導S1P1內化與ERY保守基序有關.
목적:연구FTY720유도1형1-린산초안순수체(S1P1)내화여후자보수기서지간적관계.방법:이HA-S1P1(WT)-Myc-EGFP-N1융합표체재체위모판,응용중첩PCR적방법,장S1P1보수기서ERY돌변위ENY,구건HA-S1P1(R142N)-Myc-EGFP-N1융합표체재체.측서감정후,경Polyfect전염입HEK293세포.G418사선출은정세포주.100 nmol/L FTY720처리3、6、12소시후,형광현미경하관찰S1P1재HEK293세포상적표체정황.결과:HA-S1P1(R142N)-Myc-EGFP-N1재체피성공구건,S1P1(WT)화S1P1(R142N)단백표체재HEK293은정세포주적표면,FTY720능유도S1P1(WT)내화,단불능유도S1P1(R142N)내화.결론:FTY720유도S1P1내화여ERY보수기서유관.
