医学信息
醫學信息
의학신식
MEDICAL INFORMATION
2009年
11期
2373-2375
,共3页
崔颖%谢策%魏晓晴%赵莹%吕广艳%王辉%高颖
崔穎%謝策%魏曉晴%趙瑩%呂廣豔%王輝%高穎
최영%사책%위효청%조형%려엄염%왕휘%고영
MLCK%重组载体%突变体
MLCK%重組載體%突變體
MLCK%중조재체%돌변체
目的 构建重组全长平滑肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)ATP结合位点突变体,以研究平滑肌MLCK的结构与功能.方法 利用试剂盒对MLCK ATP结合位点进行定点突变,构建全长平滑肌MLCK ATP结合位点突变体重组表达载体pCold/BsMLCK/△ATP,在大肠杆菌中表达:利用SDS-PAGE鉴定表达的重组全长平滑肌MLCK ATP结合位点突变体在细胞中的分布:运用亲和层析及凝胶过滤分离纯化重组全长MLCK并利用SDS-PAGE鉴定表达MLCK的纯度.结果 重组全长MLCK/△ATP(突变型)在大肠杆菌中以可溶的形式大量表达;在样品的上清和沉淀中均有重组全长MLCK/△ATP表达;经CaM-Sepharose 4B和Superose 6 HR纯化,SDS-PAGE鉴定得到单一的表达条带.结论 重组全长MLCK/△ATP(突变型)可以在大肠杆菌中以可溶形式大量表达;SDS-PAGE结果显示重组全长MLCK/△ATP可以通过亲和层析和凝胶过滤纯化得到单一的条带.
目的 構建重組全長平滑肌肌毬蛋白輕鏈激酶(myosin light chain kinase,MLCK)ATP結閤位點突變體,以研究平滑肌MLCK的結構與功能.方法 利用試劑盒對MLCK ATP結閤位點進行定點突變,構建全長平滑肌MLCK ATP結閤位點突變體重組錶達載體pCold/BsMLCK/△ATP,在大腸桿菌中錶達:利用SDS-PAGE鑒定錶達的重組全長平滑肌MLCK ATP結閤位點突變體在細胞中的分佈:運用親和層析及凝膠過濾分離純化重組全長MLCK併利用SDS-PAGE鑒定錶達MLCK的純度.結果 重組全長MLCK/△ATP(突變型)在大腸桿菌中以可溶的形式大量錶達;在樣品的上清和沉澱中均有重組全長MLCK/△ATP錶達;經CaM-Sepharose 4B和Superose 6 HR純化,SDS-PAGE鑒定得到單一的錶達條帶.結論 重組全長MLCK/△ATP(突變型)可以在大腸桿菌中以可溶形式大量錶達;SDS-PAGE結果顯示重組全長MLCK/△ATP可以通過親和層析和凝膠過濾純化得到單一的條帶.
목적 구건중조전장평활기기구단백경련격매(myosin light chain kinase,MLCK)ATP결합위점돌변체,이연구평활기MLCK적결구여공능.방법 이용시제합대MLCK ATP결합위점진행정점돌변,구건전장평활기MLCK ATP결합위점돌변체중조표체재체pCold/BsMLCK/△ATP,재대장간균중표체:이용SDS-PAGE감정표체적중조전장평활기MLCK ATP결합위점돌변체재세포중적분포:운용친화층석급응효과려분리순화중조전장MLCK병이용SDS-PAGE감정표체MLCK적순도.결과 중조전장MLCK/△ATP(돌변형)재대장간균중이가용적형식대량표체;재양품적상청화침정중균유중조전장MLCK/△ATP표체;경CaM-Sepharose 4B화Superose 6 HR순화,SDS-PAGE감정득도단일적표체조대.결론 중조전장MLCK/△ATP(돌변형)가이재대장간균중이가용형식대량표체;SDS-PAGE결과현시중조전장MLCK/△ATP가이통과친화층석화응효과려순화득도단일적조대.
