中国医药生物技术
中國醫藥生物技術
중국의약생물기술
CHINESE MEDICINAL BIOTECHNOLOGY
2012年
4期
270-275
,共6页
杨军%陈晓黎%王一理%司履生
楊軍%陳曉黎%王一理%司履生
양군%진효려%왕일리%사리생
抗体生成%免疫疗法%核定位信号%基因免疫
抗體生成%免疫療法%覈定位信號%基因免疫
항체생성%면역요법%핵정위신호%기인면역
目的 研究表达产物的不同亚细胞定位对基因免疫诱导的体液免疫应答水平的影响,为基因疫苗的设计提供参考.方法 利用分子克隆技术,分别构建能表达不同细胞定位的EGFP-HPV16L1 融合蛋白和截短型 EGFP-HPV16L1△NLS融合蛋白的重组 pcDNA-EGFP-HPV16L1 和 pcDNA-EGFPHPV16L1△NLS 真核表达载体;通过转染 CHO 细胞,并在倒置荧光显微镜下观察表达产物的细胞定位;用重组pcDNA 载体免疫 BALB/c 小鼠;EGFP 作为抗原,ELISA法检测血清抗体吸光度.结果 ①重组 pcDNA-EGFP-HPV16L1 转染的CHO 细胞核内可见到绿色荧光,pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS 真核表达载体转染的 CHO 细胞质内可见到绿色荧光;②两种不同的重组 pcDNA 载体均可诱导 BALB/c 小鼠体液免疫反应,但重组 pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS 真核表达载体免疫组小鼠 IgG 抗体 A450 值显著高于重组pcDNAEGFP-HPV16L1 真核表达载体免疫组小鼠 IgG 抗体 A450值(P < 0.001).结论 表达产物的不同细胞定位可影响基因免疫诱发的体液免疫应答水平,定位于细胞质内的蛋白分子较定位于细胞核的蛋白分子能诱导机体更强的体液免疫反应,这为以增强体液免疫反应为目的 的基因疫苗的设计提供了参考.
目的 研究錶達產物的不同亞細胞定位對基因免疫誘導的體液免疫應答水平的影響,為基因疫苗的設計提供參攷.方法 利用分子剋隆技術,分彆構建能錶達不同細胞定位的EGFP-HPV16L1 融閤蛋白和截短型 EGFP-HPV16L1△NLS融閤蛋白的重組 pcDNA-EGFP-HPV16L1 和 pcDNA-EGFPHPV16L1△NLS 真覈錶達載體;通過轉染 CHO 細胞,併在倒置熒光顯微鏡下觀察錶達產物的細胞定位;用重組pcDNA 載體免疫 BALB/c 小鼠;EGFP 作為抗原,ELISA法檢測血清抗體吸光度.結果 ①重組 pcDNA-EGFP-HPV16L1 轉染的CHO 細胞覈內可見到綠色熒光,pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS 真覈錶達載體轉染的 CHO 細胞質內可見到綠色熒光;②兩種不同的重組 pcDNA 載體均可誘導 BALB/c 小鼠體液免疫反應,但重組 pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS 真覈錶達載體免疫組小鼠 IgG 抗體 A450 值顯著高于重組pcDNAEGFP-HPV16L1 真覈錶達載體免疫組小鼠 IgG 抗體 A450值(P < 0.001).結論 錶達產物的不同細胞定位可影響基因免疫誘髮的體液免疫應答水平,定位于細胞質內的蛋白分子較定位于細胞覈的蛋白分子能誘導機體更彊的體液免疫反應,這為以增彊體液免疫反應為目的 的基因疫苗的設計提供瞭參攷.
목적 연구표체산물적불동아세포정위대기인면역유도적체액면역응답수평적영향,위기인역묘적설계제공삼고.방법 이용분자극륭기술,분별구건능표체불동세포정위적EGFP-HPV16L1 융합단백화절단형 EGFP-HPV16L1△NLS융합단백적중조 pcDNA-EGFP-HPV16L1 화 pcDNA-EGFPHPV16L1△NLS 진핵표체재체;통과전염 CHO 세포,병재도치형광현미경하관찰표체산물적세포정위;용중조pcDNA 재체면역 BALB/c 소서;EGFP 작위항원,ELISA법검측혈청항체흡광도.결과 ①중조 pcDNA-EGFP-HPV16L1 전염적CHO 세포핵내가견도록색형광,pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS 진핵표체재체전염적 CHO 세포질내가견도록색형광;②량충불동적중조 pcDNA 재체균가유도 BALB/c 소서체액면역반응,단중조 pcDNA-EGFP-HPV16L1△NLS 진핵표체재체면역조소서 IgG 항체 A450 치현저고우중조pcDNAEGFP-HPV16L1 진핵표체재체면역조소서 IgG 항체 A450치(P < 0.001).결론 표체산물적불동세포정위가영향기인면역유발적체액면역응답수평,정위우세포질내적단백분자교정위우세포핵적단백분자능유도궤체경강적체액면역반응,저위이증강체액면역반응위목적 적기인역묘적설계제공료삼고.
