湖南师范大学自然科学学报
湖南師範大學自然科學學報
호남사범대학자연과학학보
ACTA SCIENTIARUM NATURALIUM UNIVERSITATIS NORMALIS HUNANENSIS
2003年
3期
67-72
,共6页
虎纹捕鸟蛛毒素-IV (HWTX-IV)%突变体%固相多肽合成%氧化复性%生物学活性
虎紋捕鳥蛛毒素-IV (HWTX-IV)%突變體%固相多肽閤成%氧化複性%生物學活性
호문포조주독소-IV (HWTX-IV)%돌변체%고상다태합성%양화복성%생물학활성
用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽合成的方法在固相多肽合成仪上合成了用丙氨酸代替虎纹捕鸟蛛毒素-IV的第27位的赖氨酸的突变体K27A-HWTX-IV,通过反相HPLC对不同条件下突变体的氧化复性结果进行监测,摸索出其最佳氧化复性条件为:0.1 mol/L Tris-HCl,pH 8.0,GSH 1 mmol/L GSSG 0.1 mmol/L的复性缓冲液,样品浓度为0.1 mg/mL .复性产物经HPLC纯化并用基质辅助激光解吸飞行时间质谱法进行鉴定,相对分子质量为4 050.63 Da.生物学活性实验小鼠离体膈神经-膈肌标本测活实验表明: 10 μg/mL天然HWTX-IV阻断小鼠离体膈神经-膈肌接头传递时间为16 min,10 μg/mL复性后的突变体阻断小鼠离体膈神经-膈肌接头传递时间为120 min,残基的替换导致突变体生物学活性比天然毒素少,证明了第27位的赖氨酸为虎纹捕鸟蛛毒素-IV活性相关的残基.
用芴甲氧羰基(Fmoc)固相多肽閤成的方法在固相多肽閤成儀上閤成瞭用丙氨痠代替虎紋捕鳥蛛毒素-IV的第27位的賴氨痠的突變體K27A-HWTX-IV,通過反相HPLC對不同條件下突變體的氧化複性結果進行鑑測,摸索齣其最佳氧化複性條件為:0.1 mol/L Tris-HCl,pH 8.0,GSH 1 mmol/L GSSG 0.1 mmol/L的複性緩遲液,樣品濃度為0.1 mg/mL .複性產物經HPLC純化併用基質輔助激光解吸飛行時間質譜法進行鑒定,相對分子質量為4 050.63 Da.生物學活性實驗小鼠離體膈神經-膈肌標本測活實驗錶明: 10 μg/mL天然HWTX-IV阻斷小鼠離體膈神經-膈肌接頭傳遞時間為16 min,10 μg/mL複性後的突變體阻斷小鼠離體膈神經-膈肌接頭傳遞時間為120 min,殘基的替換導緻突變體生物學活性比天然毒素少,證明瞭第27位的賴氨痠為虎紋捕鳥蛛毒素-IV活性相關的殘基.
용물갑양탄기(Fmoc)고상다태합성적방법재고상다태합성의상합성료용병안산대체호문포조주독소-IV적제27위적뢰안산적돌변체K27A-HWTX-IV,통과반상HPLC대불동조건하돌변체적양화복성결과진행감측,모색출기최가양화복성조건위:0.1 mol/L Tris-HCl,pH 8.0,GSH 1 mmol/L GSSG 0.1 mmol/L적복성완충액,양품농도위0.1 mg/mL .복성산물경HPLC순화병용기질보조격광해흡비행시간질보법진행감정,상대분자질량위4 050.63 Da.생물학활성실험소서리체격신경-격기표본측활실험표명: 10 μg/mL천연HWTX-IV조단소서리체격신경-격기접두전체시간위16 min,10 μg/mL복성후적돌변체조단소서리체격신경-격기접두전체시간위120 min,잔기적체환도치돌변체생물학활성비천연독소소,증명료제27위적뢰안산위호문포조주독소-IV활성상관적잔기.
