中国肺癌杂志
中國肺癌雜誌
중국폐암잡지
CHINESE JOURNAL OF LUNG CANCER
2006年
2期
117-122
,共6页
朱大兴%周清华%王艳萍%朱文%陈小禾%孙芝琳
硃大興%週清華%王豔萍%硃文%陳小禾%孫芝琳
주대흥%주청화%왕염평%주문%진소화%손지림
定点突变%nm23-H1%EGFP%突变型nm23-H1-EGFP融合基因
定點突變%nm23-H1%EGFP%突變型nm23-H1-EGFP融閤基因
정점돌변%nm23-H1%EGFP%돌변형nm23-H1-EGFP융합기인
背景与目的以前的研究已经证明nm23-H1基因是肿瘤转移抑制基因,但其抑制肿瘤转移的分子机制目前还不完全清楚.基因定点突变技术可以精确地改变基因的特定碱基序列,获得突变蛋白质.本研究的目的是应用基因定点突变技术构建突变型nm23-H1-增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因,为进一步研究肿瘤抑制基因nm23-H1的功能、生化作用机制提供理论基础和实验依据.方法以逆转录病毒PLXSN野生型nm23-H1-EGFP质粒为突变模板,应用QuikChangeTM定点突变方法,简单、快速、高效地引入nm23H1S44A、nm23-H1P96S、nm23-H1H118F、nm23 H1 S120G四个点突变和一个联合位点突变nm23-H1 P96S-S120G,构建了突变型nm23-H1-EGFP融合基因.结果成功构建了nm23-H1S44A-EGFP、nm23-H1P96S-EGFP、nm23-H1H118F-EGFP、nm23-H1S120G-EGFP、nm23-H1 P96S-S120G-EGFP五个突变型nm23-H1-EGFP融合基因,经DNA序列分析突变的碱基序列与实验设计完全一致.结论成功构建了五个具有不同突变位点的突变型nm23-H1-EGFP融合基因.QuikChangeTM定点突变技术是一种简单、快速、高效的基因定点突变方法.
揹景與目的以前的研究已經證明nm23-H1基因是腫瘤轉移抑製基因,但其抑製腫瘤轉移的分子機製目前還不完全清楚.基因定點突變技術可以精確地改變基因的特定堿基序列,穫得突變蛋白質.本研究的目的是應用基因定點突變技術構建突變型nm23-H1-增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)融閤基因,為進一步研究腫瘤抑製基因nm23-H1的功能、生化作用機製提供理論基礎和實驗依據.方法以逆轉錄病毒PLXSN野生型nm23-H1-EGFP質粒為突變模闆,應用QuikChangeTM定點突變方法,簡單、快速、高效地引入nm23H1S44A、nm23-H1P96S、nm23-H1H118F、nm23 H1 S120G四箇點突變和一箇聯閤位點突變nm23-H1 P96S-S120G,構建瞭突變型nm23-H1-EGFP融閤基因.結果成功構建瞭nm23-H1S44A-EGFP、nm23-H1P96S-EGFP、nm23-H1H118F-EGFP、nm23-H1S120G-EGFP、nm23-H1 P96S-S120G-EGFP五箇突變型nm23-H1-EGFP融閤基因,經DNA序列分析突變的堿基序列與實驗設計完全一緻.結論成功構建瞭五箇具有不同突變位點的突變型nm23-H1-EGFP融閤基因.QuikChangeTM定點突變技術是一種簡單、快速、高效的基因定點突變方法.
배경여목적이전적연구이경증명nm23-H1기인시종류전이억제기인,단기억제종류전이적분자궤제목전환불완전청초.기인정점돌변기술가이정학지개변기인적특정감기서렬,획득돌변단백질.본연구적목적시응용기인정점돌변기술구건돌변형nm23-H1-증강형록색형광단백(EGFP)융합기인,위진일보연구종류억제기인nm23-H1적공능、생화작용궤제제공이론기출화실험의거.방법이역전록병독PLXSN야생형nm23-H1-EGFP질립위돌변모판,응용QuikChangeTM정점돌변방법,간단、쾌속、고효지인입nm23H1S44A、nm23-H1P96S、nm23-H1H118F、nm23 H1 S120G사개점돌변화일개연합위점돌변nm23-H1 P96S-S120G,구건료돌변형nm23-H1-EGFP융합기인.결과성공구건료nm23-H1S44A-EGFP、nm23-H1P96S-EGFP、nm23-H1H118F-EGFP、nm23-H1S120G-EGFP、nm23-H1 P96S-S120G-EGFP오개돌변형nm23-H1-EGFP융합기인,경DNA서렬분석돌변적감기서렬여실험설계완전일치.결론성공구건료오개구유불동돌변위점적돌변형nm23-H1-EGFP융합기인.QuikChangeTM정점돌변기술시일충간단、쾌속、고효적기인정점돌변방법.
