中国血吸虫病防治杂志
中國血吸蟲病防治雜誌
중국혈흡충병방치잡지
CHINESE JOURNAL OF SCHISTOSOMIASIS CONTROL
2007年
3期
165-169
,共5页
沈玉娟%夏超明%曹建平%徐馀信%李小红%刘海鹏%卢潍媛%刘述先
瀋玉娟%夏超明%曹建平%徐馀信%李小紅%劉海鵬%盧濰媛%劉述先
침옥연%하초명%조건평%서여신%리소홍%류해붕%로유원%류술선
日本血吸虫%次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶%克隆%表达%重组抗原
日本血吸蟲%次黃嘌呤鳥嘌呤燐痠覈糖轉移酶%剋隆%錶達%重組抗原
일본혈흡충%차황표령조표령린산핵당전이매%극륭%표체%중조항원
目的 克隆和表达日本血吸虫大陆株次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)编码基因.方法 依据GenBank日本血吸虫HGPRT开放阅读框(ORF)设计一对引物,上游和下游引物分别引入BamH Ⅰ和Sal Ⅰ酶切位点.以日本血吸虫大陆株(安徽株,简称Sjc-A)成虫总RNA为模板,反转录PCR(RT-PCR)扩增日本血吸虫大陆株HGPRT(SjcHGPRT)全长编码基因.经双酶切纯化的PCR产物与同样双酶切纯化的pET28a质粒DNA片段用T4 DNA连接酶连接,构建重组质粒pET28a-SjcHGPRT,转化感受态E.coli BL21,并大量扩增.重组质粒DNA经限制性内切酶双酶切、PCR、琼脂糖凝胶电泳和核苷酸序列测定进行鉴定.pET28a-SjcHGPRT/E.coli BL21工程菌用IPTG诱导表达,重组蛋白用SDS-PAGE和Western blot分析.结果 SjcHGPRT编码基因RT-PCR产物约700 bp,构建的pET28a-SjcHGPRT重组质粒DNA经限制性内切酶双酶切和PCR扩增产物于琼脂糖凝胶电泳均观察到相同大小的基因片段,根据核苷酸序列测序结果推导的氨基酸序列与报道的日本血吸虫大陆株(湖南株,简称Sjc-H)及曼氏血吸虫HGPRT分别有99%和83%的同源性.获得的重组蛋白(reSjcHGPRT)经SDS-PAGE和Western blot分析,分子量约30 kDa,并能被抗His-G-HRP抗体、日本血吸虫感染小鼠血清和日本血吸虫病人血清识别.结论 日本血吸虫大陆株(安徽株)HGPRT表达获得成功,并获得了纯化重组蛋白,为开展该分子功能和免疫原性研究奠定了基础.
目的 剋隆和錶達日本血吸蟲大陸株次黃嘌呤鳥嘌呤燐痠覈糖轉移酶(HGPRT)編碼基因.方法 依據GenBank日本血吸蟲HGPRT開放閱讀框(ORF)設計一對引物,上遊和下遊引物分彆引入BamH Ⅰ和Sal Ⅰ酶切位點.以日本血吸蟲大陸株(安徽株,簡稱Sjc-A)成蟲總RNA為模闆,反轉錄PCR(RT-PCR)擴增日本血吸蟲大陸株HGPRT(SjcHGPRT)全長編碼基因.經雙酶切純化的PCR產物與同樣雙酶切純化的pET28a質粒DNA片段用T4 DNA連接酶連接,構建重組質粒pET28a-SjcHGPRT,轉化感受態E.coli BL21,併大量擴增.重組質粒DNA經限製性內切酶雙酶切、PCR、瓊脂糖凝膠電泳和覈苷痠序列測定進行鑒定.pET28a-SjcHGPRT/E.coli BL21工程菌用IPTG誘導錶達,重組蛋白用SDS-PAGE和Western blot分析.結果 SjcHGPRT編碼基因RT-PCR產物約700 bp,構建的pET28a-SjcHGPRT重組質粒DNA經限製性內切酶雙酶切和PCR擴增產物于瓊脂糖凝膠電泳均觀察到相同大小的基因片段,根據覈苷痠序列測序結果推導的氨基痠序列與報道的日本血吸蟲大陸株(湖南株,簡稱Sjc-H)及曼氏血吸蟲HGPRT分彆有99%和83%的同源性.穫得的重組蛋白(reSjcHGPRT)經SDS-PAGE和Western blot分析,分子量約30 kDa,併能被抗His-G-HRP抗體、日本血吸蟲感染小鼠血清和日本血吸蟲病人血清識彆.結論 日本血吸蟲大陸株(安徽株)HGPRT錶達穫得成功,併穫得瞭純化重組蛋白,為開展該分子功能和免疫原性研究奠定瞭基礎.
목적 극륭화표체일본혈흡충대륙주차황표령조표령린산핵당전이매(HGPRT)편마기인.방법 의거GenBank일본혈흡충HGPRT개방열독광(ORF)설계일대인물,상유화하유인물분별인입BamH Ⅰ화Sal Ⅰ매절위점.이일본혈흡충대륙주(안휘주,간칭Sjc-A)성충총RNA위모판,반전록PCR(RT-PCR)확증일본혈흡충대륙주HGPRT(SjcHGPRT)전장편마기인.경쌍매절순화적PCR산물여동양쌍매절순화적pET28a질립DNA편단용T4 DNA련접매련접,구건중조질립pET28a-SjcHGPRT,전화감수태E.coli BL21,병대량확증.중조질립DNA경한제성내절매쌍매절、PCR、경지당응효전영화핵감산서렬측정진행감정.pET28a-SjcHGPRT/E.coli BL21공정균용IPTG유도표체,중조단백용SDS-PAGE화Western blot분석.결과 SjcHGPRT편마기인RT-PCR산물약700 bp,구건적pET28a-SjcHGPRT중조질립DNA경한제성내절매쌍매절화PCR확증산물우경지당응효전영균관찰도상동대소적기인편단,근거핵감산서렬측서결과추도적안기산서렬여보도적일본혈흡충대륙주(호남주,간칭Sjc-H)급만씨혈흡충HGPRT분별유99%화83%적동원성.획득적중조단백(reSjcHGPRT)경SDS-PAGE화Western blot분석,분자량약30 kDa,병능피항His-G-HRP항체、일본혈흡충감염소서혈청화일본혈흡충병인혈청식별.결론 일본혈흡충대륙주(안휘주)HGPRT표체획득성공,병획득료순화중조단백,위개전해분자공능화면역원성연구전정료기출.
