感染、炎症、修复
感染、炎癥、脩複
감염、염증、수복
INFECTION， INFLAMMATION， REPAIR
2008年
2期
77-81,封3
,共6页
黄宏%张波%朱方强%孙宏振%冯帅南%王正国%朱佩芳
黃宏%張波%硃方彊%孫宏振%馮帥南%王正國%硃珮芳
황굉%장파%주방강%손굉진%풍수남%왕정국%주패방
脂肪组织%干细胞%内皮细胞生长因子%骨形态发生蛋白-2%细胞转染%基因表达
脂肪組織%榦細胞%內皮細胞生長因子%骨形態髮生蛋白-2%細胞轉染%基因錶達
지방조직%간세포%내피세포생장인자%골형태발생단백-2%세포전염%기인표체
目的:探讨脂肪组织来源的干细胞(ADSCs)表达外源性基因的可能性.方法:取小香猪腹部皮下脂肪组织,通过Ⅰ型胶原酶消化、离心等方法分离培养ADSCs,再经原代培养和传代培养.利用成骨诱导剂(10-7mol/L地塞米松、10 mmol/L β-甘油磷酸钠和50 mg/L左旋抗坏血酸)诱导ADSCs向成骨方向分化,观察其生长形态,并通过Gomori改良钙钴法和yon Kossa染色对其成骨表型进行鉴定.另设一对照组.培养基中不加入成骨诱导剂.脂质体介导人内皮细胞生长因子(hVEGF)和骨形态发生蛋白-2(hBMP-2)转染ADSCs细胞.观察转染后细胞形态和生长情况,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫细胞化学方法分别检测hVEGFmRNA,BMP-2 mRNA及其蛋白质表达.结果:成骨诱导剂能显著诱导体外培养的ADSCs向成骨细胞分化,诱导19d的ADsCs体积增大,细胞由梭形变为多边形,Gomori改良钙钴法染色显示其胞浆内富含碱性磷酸酶颗粒,诱导15d和19 d,碱性磷酸酶阳性细胞分别为(25.0±7.5)%和(49.7±6.9)%.von Kossa染色表明聚集的细胞团中央有钙化结节形成.RT-PCR检测证实.经质粒转染的ADSCS中hVEGF和hBMP-2基因表达明显增强,对照组呈弱表达.免疫组织化学检测证实转染ADSCs内有棕色的阳性颗粒出现,未转染细胞则呈现阴性.结论:ADSCs能被成功诱导为成骨细胞,hVEGF和hBMP-2基因能成功地转入ADSCs并表达,这为促进骨组织工程的血管化和成骨活性奠定了基础.
目的:探討脂肪組織來源的榦細胞(ADSCs)錶達外源性基因的可能性.方法:取小香豬腹部皮下脂肪組織,通過Ⅰ型膠原酶消化、離心等方法分離培養ADSCs,再經原代培養和傳代培養.利用成骨誘導劑(10-7mol/L地塞米鬆、10 mmol/L β-甘油燐痠鈉和50 mg/L左鏇抗壞血痠)誘導ADSCs嚮成骨方嚮分化,觀察其生長形態,併通過Gomori改良鈣鈷法和yon Kossa染色對其成骨錶型進行鑒定.另設一對照組.培養基中不加入成骨誘導劑.脂質體介導人內皮細胞生長因子(hVEGF)和骨形態髮生蛋白-2(hBMP-2)轉染ADSCs細胞.觀察轉染後細胞形態和生長情況,用逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)和免疫細胞化學方法分彆檢測hVEGFmRNA,BMP-2 mRNA及其蛋白質錶達.結果:成骨誘導劑能顯著誘導體外培養的ADSCs嚮成骨細胞分化,誘導19d的ADsCs體積增大,細胞由梭形變為多邊形,Gomori改良鈣鈷法染色顯示其胞漿內富含堿性燐痠酶顆粒,誘導15d和19 d,堿性燐痠酶暘性細胞分彆為(25.0±7.5)%和(49.7±6.9)%.von Kossa染色錶明聚集的細胞糰中央有鈣化結節形成.RT-PCR檢測證實.經質粒轉染的ADSCS中hVEGF和hBMP-2基因錶達明顯增彊,對照組呈弱錶達.免疫組織化學檢測證實轉染ADSCs內有棕色的暘性顆粒齣現,未轉染細胞則呈現陰性.結論:ADSCs能被成功誘導為成骨細胞,hVEGF和hBMP-2基因能成功地轉入ADSCs併錶達,這為促進骨組織工程的血管化和成骨活性奠定瞭基礎.
목적:탐토지방조직래원적간세포(ADSCs)표체외원성기인적가능성.방법:취소향저복부피하지방조직,통과Ⅰ형효원매소화、리심등방법분리배양ADSCs,재경원대배양화전대배양.이용성골유도제(10-7mol/L지새미송、10 mmol/L β-감유린산납화50 mg/L좌선항배혈산)유도ADSCs향성골방향분화,관찰기생장형태,병통과Gomori개량개고법화yon Kossa염색대기성골표형진행감정.령설일대조조.배양기중불가입성골유도제.지질체개도인내피세포생장인자(hVEGF)화골형태발생단백-2(hBMP-2)전염ADSCs세포.관찰전염후세포형태화생장정황,용역전록-취합매련반응(RT-PCR)화면역세포화학방법분별검측hVEGFmRNA,BMP-2 mRNA급기단백질표체.결과:성골유도제능현저유도체외배양적ADSCs향성골세포분화,유도19d적ADsCs체적증대,세포유사형변위다변형,Gomori개량개고법염색현시기포장내부함감성린산매과립,유도15d화19 d,감성린산매양성세포분별위(25.0±7.5)%화(49.7±6.9)%.von Kossa염색표명취집적세포단중앙유개화결절형성.RT-PCR검측증실.경질립전염적ADSCS중hVEGF화hBMP-2기인표체명현증강,대조조정약표체.면역조직화학검측증실전염ADSCs내유종색적양성과립출현,미전염세포칙정현음성.결론:ADSCs능피성공유도위성골세포,hVEGF화hBMP-2기인능성공지전입ADSCs병표체,저위촉진골조직공정적혈관화화성골활성전정료기출.
