生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
1期
170-173,178
,共5页
张波%张璟%张庆友%莫桂玲%苏志坚%杨鹏辉%徐单单%郑青
張波%張璟%張慶友%莫桂玲%囌誌堅%楊鵬輝%徐單單%鄭青
장파%장경%장경우%막계령%소지견%양붕휘%서단단%정청
hsRAGE%毕赤酵母%组成型表达%纯化%信号通路%生物活性
hsRAGE%畢赤酵母%組成型錶達%純化%信號通路%生物活性
hsRAGE%필적효모%조성형표체%순화%신호통로%생물활성
将人可溶性晚期糖基化终产物受体(human soluble Receptor for advanced glycation end product,hsRAGE)cDNA插入巴斯德毕赤酵母组成型表达载体pGAPZαA,构建重组表达栽体pGAPZαA-hsRAGE,并转化到毕赤酵母X-33中,利用含抗生素Zeocin的YPD平板筛选重组子.重组菌株在甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAP)启动子的调控作用下,进行组成型分泌表达,在发酵液中获得了相对分子质量约45 kD的重组蛋白.摇瓶发酵结果表明,在发酵温度30℃、pH6.0、发酵时间72 h时重组蛋白表达占发酵上清液总蛋白68.4%.Western blotting显示,重组蛋白能够被相应抗体所识别.纯化后的重组hsRAGE具有与AGEs相互结合的活性,并能够显著地抑制AGEs诱导的人血管内皮细胞系ECV-304细胞NF-κB信号通路中NF-κB/p65基因的表达.
將人可溶性晚期糖基化終產物受體(human soluble Receptor for advanced glycation end product,hsRAGE)cDNA插入巴斯德畢赤酵母組成型錶達載體pGAPZαA,構建重組錶達栽體pGAPZαA-hsRAGE,併轉化到畢赤酵母X-33中,利用含抗生素Zeocin的YPD平闆篩選重組子.重組菌株在甘油醛-3-燐痠脫氫酶(GAP)啟動子的調控作用下,進行組成型分泌錶達,在髮酵液中穫得瞭相對分子質量約45 kD的重組蛋白.搖瓶髮酵結果錶明,在髮酵溫度30℃、pH6.0、髮酵時間72 h時重組蛋白錶達佔髮酵上清液總蛋白68.4%.Western blotting顯示,重組蛋白能夠被相應抗體所識彆.純化後的重組hsRAGE具有與AGEs相互結閤的活性,併能夠顯著地抑製AGEs誘導的人血管內皮細胞繫ECV-304細胞NF-κB信號通路中NF-κB/p65基因的錶達.
장인가용성만기당기화종산물수체(human soluble Receptor for advanced glycation end product,hsRAGE)cDNA삽입파사덕필적효모조성형표체재체pGAPZαA,구건중조표체재체pGAPZαA-hsRAGE,병전화도필적효모X-33중,이용함항생소Zeocin적YPD평판사선중조자.중조균주재감유철-3-린산탈경매(GAP)계동자적조공작용하,진행조성형분비표체,재발효액중획득료상대분자질량약45 kD적중조단백.요병발효결과표명,재발효온도30℃、pH6.0、발효시간72 h시중조단백표체점발효상청액총단백68.4%.Western blotting현시,중조단백능구피상응항체소식별.순화후적중조hsRAGE구유여AGEs상호결합적활성,병능구현저지억제AGEs유도적인혈관내피세포계ECV-304세포NF-κB신호통로중NF-κB/p65기인적표체.
