河南医学研究
河南醫學研究
하남의학연구
HENAN MEDICAL RESEARCH
2012年
3期
271-273
,共3页
丁亚骏%何璐云%王亚楠%张亚娟%康巧珍
丁亞駿%何璐雲%王亞楠%張亞娟%康巧珍
정아준%하로운%왕아남%장아연%강교진
亲和层析%融合蛋白%麦芽糖结合蛋白%中性粒细胞激活蛋白
親和層析%融閤蛋白%麥芽糖結閤蛋白%中性粒細胞激活蛋白
친화층석%융합단백%맥아당결합단백%중성립세포격활단백
目的:直链淀粉树脂亲和层析法分离纯化重组麦芽糖结合蛋白-中性粒细胞激活蛋白(recombinant maltose-binding protein-neutrophil-activating protein,rMBP-NAP).用于支气管哮喘模型小鼠进行免疫调节实验.方法:IPTG诱导基因工程菌E.coli TB1 (pMAL-c2X-nap)表达rMBP-NAP,离心收获细胞,过柱缓冲液重悬菌体并超声破碎,再次离心取上清和沉淀,SDS-PAGE分析rMBP-NAP可溶性；直链淀粉树脂亲和层析法分离纯化rMBP-NAP;SDS-PAGE凝胶扫描分析纯化后rMBP-NAP纯度；蛋白定量试剂盒测定rMBP-NAP浓度.结果:IPTG诱导工程菌表达的rMBP-NAP主要以可溶性形式存在于超声上清中,相对分子质量约为57kD,与预期结果一致；亲和层析法纯化rMBP-NAP纯度可达96.5％,浓度可达0.625g/L.结论:用直链淀粉树脂亲和层析法,可纯化得到高纯度、高浓度的融合蛋白rMBP-NAP.
目的:直鏈澱粉樹脂親和層析法分離純化重組麥芽糖結閤蛋白-中性粒細胞激活蛋白(recombinant maltose-binding protein-neutrophil-activating protein,rMBP-NAP).用于支氣管哮喘模型小鼠進行免疫調節實驗.方法:IPTG誘導基因工程菌E.coli TB1 (pMAL-c2X-nap)錶達rMBP-NAP,離心收穫細胞,過柱緩遲液重懸菌體併超聲破碎,再次離心取上清和沉澱,SDS-PAGE分析rMBP-NAP可溶性；直鏈澱粉樹脂親和層析法分離純化rMBP-NAP;SDS-PAGE凝膠掃描分析純化後rMBP-NAP純度；蛋白定量試劑盒測定rMBP-NAP濃度.結果:IPTG誘導工程菌錶達的rMBP-NAP主要以可溶性形式存在于超聲上清中,相對分子質量約為57kD,與預期結果一緻；親和層析法純化rMBP-NAP純度可達96.5％,濃度可達0.625g/L.結論:用直鏈澱粉樹脂親和層析法,可純化得到高純度、高濃度的融閤蛋白rMBP-NAP.
목적:직련정분수지친화층석법분리순화중조맥아당결합단백-중성립세포격활단백(recombinant maltose-binding protein-neutrophil-activating protein,rMBP-NAP).용우지기관효천모형소서진행면역조절실험.방법:IPTG유도기인공정균E.coli TB1 (pMAL-c2X-nap)표체rMBP-NAP,리심수획세포,과주완충액중현균체병초성파쇄,재차리심취상청화침정,SDS-PAGE분석rMBP-NAP가용성；직련정분수지친화층석법분리순화rMBP-NAP;SDS-PAGE응효소묘분석순화후rMBP-NAP순도；단백정량시제합측정rMBP-NAP농도.결과:IPTG유도공정균표체적rMBP-NAP주요이가용성형식존재우초성상청중,상대분자질량약위57kD,여예기결과일치；친화층석법순화rMBP-NAP순도가체96.5％,농도가체0.625g/L.결론:용직련정분수지친화층석법,가순화득도고순도、고농도적융합단백rMBP-NAP.
