中华肝脏病杂志
中華肝髒病雜誌
중화간장병잡지
CHINESE JOURNAL OF HEPATOLOGY
2005年
5期
335-338
,共4页
刘权焰%刘志苏%邬开朗%朱应
劉權燄%劉誌囌%鄔開朗%硃應
류권염%류지소%오개랑%주응
癌,肝细胞%甲硫氨酸腺苷转移酶%基因,肿瘤抑制%基因疗法
癌,肝細胞%甲硫氨痠腺苷轉移酶%基因,腫瘤抑製%基因療法
암,간세포%갑류안산선감전이매%기인,종류억제%기인요법
目的研究靶向甲硫氨酸腺苷转移酶(MAT)2A基因的小干扰RNA(siRNA)对肝癌细胞生长和细胞凋亡的影响.方法以MAT 2A为目的基因,以产生siRNA质粒载体pSilence-2.1-U6为表达模板,细胞内转录合成4条siRNA;并构建携带荧光素酶报告基因的重组质粒载体plucA-MAT 2A.脂质体转染法将重组质粒载体plucA MAT 2A与产生siRNA的质粒pSilence-2.1-U6共转染293 T细胞,定量检测荧光素酶活性,初步筛选出抑制荧光素酶表达的有效siRNA;然后将有效的siRNA转染Bel-7402肝癌细胞,半定量逆转录聚合酶链反应检测MAT2A mRNA表达,并检测转染后肝癌细胞MAT的活性,进一步采用四甲基偶氮唑盐法观察siRNA对肝癌细胞生长的抑制率,用流式细胞仪检测siRNA对肝癌细胞凋亡的影响.结果所合成的4条siRNA中有2条抑制荧光素酶表达,抑制效率分别为81%和89%,并特异性抑制肝癌细胞MAT 2A表达,降低了肝癌细胞中MAT活性,抑制肝癌细胞的生长,诱导肝癌细胞凋亡. 结论靶向MAT 2A基因的siRNA抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡; MAT2A是肝癌基因治疗的一个很有希望的靶位点.
目的研究靶嚮甲硫氨痠腺苷轉移酶(MAT)2A基因的小榦擾RNA(siRNA)對肝癌細胞生長和細胞凋亡的影響.方法以MAT 2A為目的基因,以產生siRNA質粒載體pSilence-2.1-U6為錶達模闆,細胞內轉錄閤成4條siRNA;併構建攜帶熒光素酶報告基因的重組質粒載體plucA-MAT 2A.脂質體轉染法將重組質粒載體plucA MAT 2A與產生siRNA的質粒pSilence-2.1-U6共轉染293 T細胞,定量檢測熒光素酶活性,初步篩選齣抑製熒光素酶錶達的有效siRNA;然後將有效的siRNA轉染Bel-7402肝癌細胞,半定量逆轉錄聚閤酶鏈反應檢測MAT2A mRNA錶達,併檢測轉染後肝癌細胞MAT的活性,進一步採用四甲基偶氮唑鹽法觀察siRNA對肝癌細胞生長的抑製率,用流式細胞儀檢測siRNA對肝癌細胞凋亡的影響.結果所閤成的4條siRNA中有2條抑製熒光素酶錶達,抑製效率分彆為81%和89%,併特異性抑製肝癌細胞MAT 2A錶達,降低瞭肝癌細胞中MAT活性,抑製肝癌細胞的生長,誘導肝癌細胞凋亡. 結論靶嚮MAT 2A基因的siRNA抑製肝癌細胞生長,誘導肝癌細胞凋亡; MAT2A是肝癌基因治療的一箇很有希望的靶位點.
목적연구파향갑류안산선감전이매(MAT)2A기인적소간우RNA(siRNA)대간암세포생장화세포조망적영향.방법이MAT 2A위목적기인,이산생siRNA질립재체pSilence-2.1-U6위표체모판,세포내전록합성4조siRNA;병구건휴대형광소매보고기인적중조질립재체plucA-MAT 2A.지질체전염법장중조질립재체plucA MAT 2A여산생siRNA적질립pSilence-2.1-U6공전염293 T세포,정량검측형광소매활성,초보사선출억제형광소매표체적유효siRNA;연후장유효적siRNA전염Bel-7402간암세포,반정량역전록취합매련반응검측MAT2A mRNA표체,병검측전염후간암세포MAT적활성,진일보채용사갑기우담서염법관찰siRNA대간암세포생장적억제솔,용류식세포의검측siRNA대간암세포조망적영향.결과소합성적4조siRNA중유2조억제형광소매표체,억제효솔분별위81%화89%,병특이성억제간암세포MAT 2A표체,강저료간암세포중MAT활성,억제간암세포적생장,유도간암세포조망. 결론파향MAT 2A기인적siRNA억제간암세포생장,유도간암세포조망; MAT2A시간암기인치료적일개흔유희망적파위점.
