药物生物技术
藥物生物技術
약물생물기술
PHARMACEUTICAL BIOTECHNOLOGY
2004年
1期
11-15
,共5页
SOD-TATPTD融合蛋白%原核表达%蛋白转导
SOD-TATPTD融閤蛋白%原覈錶達%蛋白轉導
SOD-TATPTD융합단백%원핵표체%단백전도
HIV-I反式激活蛋白TAT中的一段富含碱性氨基酸的短序列具有独特的跨膜转运能力,被称为TAT蛋白转导结构域(protein transduction domain,PTD).从人肺cDNA文库中PCR扩增hCu,Zn-SOD基因,插入pUC19测序;以测序质粒为模板,再用含TAT PTD编码序列的3'引物PCR扩增得hCu,Zn-SOD-TATPTD融合基因,并插入pUC19.将SOD基因和SOD-TAT PTD融合基因分别亚克隆至温控表达载体pJW2,转化大肠杆菌DH5α.SDS-PAGE和Western blot结果表明,热击诱导4h后,分别在19 ku和22 ku处出现SOD和SOD-TAT PTID目标表达条带,表达蛋白以包含体形式存在.分别提取SOD和SOD-TAT PTD包含体,复性纯化后SOD和SOD-PTD重组蛋白均具有特异的SOD酶活性,其比活性分别为12×103 NU/mg和9.9×103 NU/mg.细胞试验结果表明,与SOD相比较,SOD-TAT PTD融合蛋白能显著提高细胞内SOD酶活力.
HIV-I反式激活蛋白TAT中的一段富含堿性氨基痠的短序列具有獨特的跨膜轉運能力,被稱為TAT蛋白轉導結構域(protein transduction domain,PTD).從人肺cDNA文庫中PCR擴增hCu,Zn-SOD基因,插入pUC19測序;以測序質粒為模闆,再用含TAT PTD編碼序列的3'引物PCR擴增得hCu,Zn-SOD-TATPTD融閤基因,併插入pUC19.將SOD基因和SOD-TAT PTD融閤基因分彆亞剋隆至溫控錶達載體pJW2,轉化大腸桿菌DH5α.SDS-PAGE和Western blot結果錶明,熱擊誘導4h後,分彆在19 ku和22 ku處齣現SOD和SOD-TAT PTID目標錶達條帶,錶達蛋白以包含體形式存在.分彆提取SOD和SOD-TAT PTD包含體,複性純化後SOD和SOD-PTD重組蛋白均具有特異的SOD酶活性,其比活性分彆為12×103 NU/mg和9.9×103 NU/mg.細胞試驗結果錶明,與SOD相比較,SOD-TAT PTD融閤蛋白能顯著提高細胞內SOD酶活力.
HIV-I반식격활단백TAT중적일단부함감성안기산적단서렬구유독특적과막전운능력,피칭위TAT단백전도결구역(protein transduction domain,PTD).종인폐cDNA문고중PCR확증hCu,Zn-SOD기인,삽입pUC19측서;이측서질립위모판,재용함TAT PTD편마서렬적3'인물PCR확증득hCu,Zn-SOD-TATPTD융합기인,병삽입pUC19.장SOD기인화SOD-TAT PTD융합기인분별아극륭지온공표체재체pJW2,전화대장간균DH5α.SDS-PAGE화Western blot결과표명,열격유도4h후,분별재19 ku화22 ku처출현SOD화SOD-TAT PTID목표표체조대,표체단백이포함체형식존재.분별제취SOD화SOD-TAT PTD포함체,복성순화후SOD화SOD-PTD중조단백균구유특이적SOD매활성,기비활성분별위12×103 NU/mg화9.9×103 NU/mg.세포시험결과표명,여SOD상비교,SOD-TAT PTD융합단백능현저제고세포내SOD매활력.
