CAJ | 학술논문

背景与目的:甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)启动子调控下的目的基因能在AFP阳性肝癌组织中特异性表达;嘌呤核苷磷酸化酶(Escherichia coli purine nucleoside phosphorylase,PNP)/6-甲基嘌呤-2′-脱氧核糖核苷(6-methylpurine-2-deoxyriboside,MeP-dR)自杀基因系统具有强杀瘤效应.本研究旨在探讨AF0.3启动子调控下的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性肝癌细胞的特异性杀伤作用.方法:构建甲胎蛋白启动子AF0.3调控下PNP基因表达载体pAF0.3/PNP,导入AFP阳性肝癌细胞HepG2和阴性的肝癌细胞株SMMC7721,利用G418筛选获得稳定转染PNP基因的HepG2/0.3-PNP及SMMC7721/0.3-PNP细胞.RT-PCR检测二者在细胞中的表达.台盼蓝拒染法检测细胞增殖效应,MTT法和流式细胞仪检测两株细胞对MeP-dR的敏感性及旁观者效应,高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测PNP基因产物活性.结果:不论有氧还是缺氧条件,HepG2/0.3-PNP对MeP-dR均较为敏感,SMMC7721/0.3-PNP则对MeP-dR完全不敏感.在任何一种条件下,HepG2/AF0.3-PNP在混合细胞中比例达25%后,就可致明显旁观者效应;而在同样条件下,SMMC7721/0.3-PNP不导致明显的旁观者效应.HPLC结果显示,pAF0.3/PNP在HepG2细胞中可以将MeP-dR转化为6-MP,但其在SMMC7721中则不具有转化活性.结论:AF0.3启动子调控下的PNP/MeP-dR系统对AFP阳性HepG2细胞有较好的杀伤作用.
배경여목적:갑태단백(α-fetoprotein,AFP)계동자조공하적목적기인능재AFP양성간암조직중특이성표체;표령핵감린산화매(Escherichia coli purine nucleoside phosphorylase,PNP)/6-갑기표령-2′-탈양핵당핵감(6-methylpurine-2-deoxyriboside,MeP-dR)자살기인계통구유강살류효응.본연구지재탐토AF0.3계동자조공하적PNP/MeP-dR계통대AFP양성간암세포적특이성살상작용.방법:구건갑태단백계동자AF0.3조공하PNP기인표체재체pAF0.3/PNP,도입AFP양성간암세포HepG2화음성적간암세포주SMMC7721,이용G418사선획득은정전염PNP기인적HepG2/0.3-PNP급SMMC7721/0.3-PNP세포.RT-PCR검측이자재세포중적표체.태반람거염법검측세포증식효응,MTT법화류식세포의검측량주세포대MeP-dR적민감성급방관자효응,고효액상색보법(high performance liquid chromatography,HPLC)검측PNP기인산물활성.결과:불론유양환시결양조건,HepG2/0.3-PNP대MeP-dR균교위민감,SMMC7721/0.3-PNP칙대MeP-dR완전불민감.재임하일충조건하,HepG2/AF0.3-PNP재혼합세포중비례체25%후,취가치명현방관자효응;이재동양조건하,SMMC7721/0.3-PNP불도치명현적방관자효응.HPLC결과현시,pAF0.3/PNP재HepG2세포중가이장MeP-dR전화위6-MP,단기재SMMC7721중칙불구유전화활성.결론:AF0.3계동자조공하적PNP/MeP-dR계통대AFP양성HepG2세포유교호적살상작용.