重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2008年
14期
1570-1571,封2
,共3页
李玉艳%梁志清%李彩霞%潘静%史常旭
李玉豔%樑誌清%李綵霞%潘靜%史常旭
리옥염%량지청%리채하%반정%사상욱
脐血%CD34+细胞%慢疯毒载体%基因转染
臍血%CD34+細胞%慢瘋毒載體%基因轉染
제혈%CD34+세포%만풍독재체%기인전염
目的 探讨人脐带血CD34+细胞提取以及慢病毒转染的方法.方法 脐带血20袋,采用直接梯度离心法,或6%羟乙基淀粉沉淀加梯度离心法收集单个核细胞,检测CD34+阳性率,经MACS磁珠分离获得CD34+细胞,分为完全培养基组、增强感染剂(ENis)组,过夜培养,每组按MOI 1:1、1:10、1:50加入带GFP标记的慢病毒载体进行转染,每小组再分组分别加入0、1、5ng/mL polybrene,转染后36～48h,3、5、7d分剐在荧光显微镜下观察转染情况.结果 直接梯度法获得的单个核细胞中红细胞含量高,CD34+阳性率为0.8%VS 1.2%.MACS分离获得CD34+细胞阳性率达84.6%以上.转染后观察增强感染剂组感染率低于完全培养基组,以MOI 1:50组荧光最强,但细胞死亡较多,加入5ng/mL polybrene组细胞大片快速裂解死亡,荧光持续时间短,以MOI 1:10结合1ng/mL polybrene组阳性率高且荧光表达持续时间长.结论 MOI 1:lO结合1ng/mL polybrene可能是慢病毒转染较理想的方法.
目的 探討人臍帶血CD34+細胞提取以及慢病毒轉染的方法.方法 臍帶血20袋,採用直接梯度離心法,或6%羥乙基澱粉沉澱加梯度離心法收集單箇覈細胞,檢測CD34+暘性率,經MACS磁珠分離穫得CD34+細胞,分為完全培養基組、增彊感染劑(ENis)組,過夜培養,每組按MOI 1:1、1:10、1:50加入帶GFP標記的慢病毒載體進行轉染,每小組再分組分彆加入0、1、5ng/mL polybrene,轉染後36～48h,3、5、7d分剮在熒光顯微鏡下觀察轉染情況.結果 直接梯度法穫得的單箇覈細胞中紅細胞含量高,CD34+暘性率為0.8%VS 1.2%.MACS分離穫得CD34+細胞暘性率達84.6%以上.轉染後觀察增彊感染劑組感染率低于完全培養基組,以MOI 1:50組熒光最彊,但細胞死亡較多,加入5ng/mL polybrene組細胞大片快速裂解死亡,熒光持續時間短,以MOI 1:10結閤1ng/mL polybrene組暘性率高且熒光錶達持續時間長.結論 MOI 1:lO結閤1ng/mL polybrene可能是慢病毒轉染較理想的方法.
목적 탐토인제대혈CD34+세포제취이급만병독전염적방법.방법 제대혈20대,채용직접제도리심법,혹6%간을기정분침정가제도리심법수집단개핵세포,검측CD34+양성솔,경MACS자주분리획득CD34+세포,분위완전배양기조、증강감염제(ENis)조,과야배양,매조안MOI 1:1、1:10、1:50가입대GFP표기적만병독재체진행전염,매소조재분조분별가입0、1、5ng/mL polybrene,전염후36～48h,3、5、7d분과재형광현미경하관찰전염정황.결과 직접제도법획득적단개핵세포중홍세포함량고,CD34+양성솔위0.8%VS 1.2%.MACS분리획득CD34+세포양성솔체84.6%이상.전염후관찰증강감염제조감염솔저우완전배양기조,이MOI 1:50조형광최강,단세포사망교다,가입5ng/mL polybrene조세포대편쾌속렬해사망,형광지속시간단,이MOI 1:10결합1ng/mL polybrene조양성솔고차형광표체지속시간장.결론 MOI 1:lO결합1ng/mL polybrene가능시만병독전염교이상적방법.
