现代肿瘤医学
現代腫瘤醫學
현대종류의학
JOURNAL OF MODERN ONCOLOGY
2008年
10期
1653-1656
,共4页
上官文学%杨业鹏%周梅%李五岭
上官文學%楊業鵬%週梅%李五嶺
상관문학%양업붕%주매%리오령
官颈癌%RNA干扰%HPVl8E6%凋亡
官頸癌%RNA榦擾%HPVl8E6%凋亡
관경암%RNA간우%HPVl8E6%조망
目的:观察RNA干扰法沉默HPV18E6基因表达对宫颈癌Hela细胞生长和凋亡的影响,探索宫颈癌基因治疗的新途径.方法:针对HPV18E6 mRNA序列合成一对60bp的编码siRNA的DNA模板和一对60bp的非特异性对照DNA模板,构建pSUPER-siRNA和pSUPER-con重组质粒,瞬时转染Hela细胞;采用RT-PCR法检测质粒转染后细胞HPV18E6基因表达的变化,用蛋白免疫印迹法检测转染后Hela细胞r63、p21、Bel-2和Bax蛋白表达变化,以细胞计数法检测细胞生长情况,Hoechest/PI双荧光活细胞染色法榆测细胞凋亡.结果:pSUPER-siRNA质粒转染能有效降低HPV18E6在mRNA水平的表达,转染后48小时,抑制效率达70%以上;转染后细胞p53、p21和Bax蛋白表达显著增加,Bcl-2蛋白表达减少.RNA干扰法沉默HPV18E6基因表达后,Hela细胞增殖受到明显抑制,细胞凋亡率明显增加.结论:pSUPER-siRNA质粒转染可有效抑制HPV18E6在人宫颈癌Hela细胞中的表达,抑制Hela细胞生长并促进其凋亡.以HPV18E6为靶点的RNA干扰技术可望成为宫颈癌基因治疗的新途径.
目的:觀察RNA榦擾法沉默HPV18E6基因錶達對宮頸癌Hela細胞生長和凋亡的影響,探索宮頸癌基因治療的新途徑.方法:針對HPV18E6 mRNA序列閤成一對60bp的編碼siRNA的DNA模闆和一對60bp的非特異性對照DNA模闆,構建pSUPER-siRNA和pSUPER-con重組質粒,瞬時轉染Hela細胞;採用RT-PCR法檢測質粒轉染後細胞HPV18E6基因錶達的變化,用蛋白免疫印跡法檢測轉染後Hela細胞r63、p21、Bel-2和Bax蛋白錶達變化,以細胞計數法檢測細胞生長情況,Hoechest/PI雙熒光活細胞染色法榆測細胞凋亡.結果:pSUPER-siRNA質粒轉染能有效降低HPV18E6在mRNA水平的錶達,轉染後48小時,抑製效率達70%以上;轉染後細胞p53、p21和Bax蛋白錶達顯著增加,Bcl-2蛋白錶達減少.RNA榦擾法沉默HPV18E6基因錶達後,Hela細胞增殖受到明顯抑製,細胞凋亡率明顯增加.結論:pSUPER-siRNA質粒轉染可有效抑製HPV18E6在人宮頸癌Hela細胞中的錶達,抑製Hela細胞生長併促進其凋亡.以HPV18E6為靶點的RNA榦擾技術可望成為宮頸癌基因治療的新途徑.
목적:관찰RNA간우법침묵HPV18E6기인표체대궁경암Hela세포생장화조망적영향,탐색궁경암기인치료적신도경.방법:침대HPV18E6 mRNA서렬합성일대60bp적편마siRNA적DNA모판화일대60bp적비특이성대조DNA모판,구건pSUPER-siRNA화pSUPER-con중조질립,순시전염Hela세포;채용RT-PCR법검측질립전염후세포HPV18E6기인표체적변화,용단백면역인적법검측전염후Hela세포r63、p21、Bel-2화Bax단백표체변화,이세포계수법검측세포생장정황,Hoechest/PI쌍형광활세포염색법유측세포조망.결과:pSUPER-siRNA질립전염능유효강저HPV18E6재mRNA수평적표체,전염후48소시,억제효솔체70%이상;전염후세포p53、p21화Bax단백표체현저증가,Bcl-2단백표체감소.RNA간우법침묵HPV18E6기인표체후,Hela세포증식수도명현억제,세포조망솔명현증가.결론:pSUPER-siRNA질립전염가유효억제HPV18E6재인궁경암Hela세포중적표체,억제Hela세포생장병촉진기조망.이HPV18E6위파점적RNA간우기술가망성위궁경암기인치료적신도경.
