中国病原生物学杂志
中國病原生物學雜誌
중국병원생물학잡지
JOURNAL OF PATHOGEN BIOLOGY
2008年
8期
585-587
,共3页
余传信%殷旭仁%李健%华万全%何伟%梁幼生%高琪
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弓形虫病%诊断%环介导同温DNA扩增
弓形蟲病%診斷%環介導同溫DNA擴增
궁형충병%진단%배개도동온DNA확증
目的 建立一种快速的弓形虫活动性感染检测方法. 方法 根据刚地弓形虫特异性基因B1的基因序列设计一套用于环介导同温DNA扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的特异性引物,用DNA聚合酶Bst在65 ℃水浴箱中对含有弓形虫基因组DNA的样本进行LAMP扩增,用荧光染料SYBRⅡ染色及琼脂糖凝胶电泳,溴化乙啶染色观察结果.同时进行常规PCR对照试验. 结果 琼脂糖凝胶电泳,溴化乙啶染色发现LAMP扩增产物为大小不等的DNA片段,在扩增产物中加入荧光素SYBRⅡ顔色由紫红色变成绿色荧光,而阴性对照管仍保持紫红色.环介导同温DNA扩增的敏感性为103个弓形虫/ml, 高于常规PCR. 结论 LAMP扩增检测弓形虫DNA的方法已经建立,为发展弓形虫病快速诊断方法奠定了良好的基础.
目的 建立一種快速的弓形蟲活動性感染檢測方法. 方法 根據剛地弓形蟲特異性基因B1的基因序列設計一套用于環介導同溫DNA擴增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)的特異性引物,用DNA聚閤酶Bst在65 ℃水浴箱中對含有弓形蟲基因組DNA的樣本進行LAMP擴增,用熒光染料SYBRⅡ染色及瓊脂糖凝膠電泳,溴化乙啶染色觀察結果.同時進行常規PCR對照試驗. 結果 瓊脂糖凝膠電泳,溴化乙啶染色髮現LAMP擴增產物為大小不等的DNA片段,在擴增產物中加入熒光素SYBRⅡ顔色由紫紅色變成綠色熒光,而陰性對照管仍保持紫紅色.環介導同溫DNA擴增的敏感性為103箇弓形蟲/ml, 高于常規PCR. 結論 LAMP擴增檢測弓形蟲DNA的方法已經建立,為髮展弓形蟲病快速診斷方法奠定瞭良好的基礎.
목적 건립일충쾌속적궁형충활동성감염검측방법. 방법 근거강지궁형충특이성기인B1적기인서렬설계일투용우배개도동온DNA확증(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)적특이성인물,용DNA취합매Bst재65 ℃수욕상중대함유궁형충기인조DNA적양본진행LAMP확증,용형광염료SYBRⅡ염색급경지당응효전영,추화을정염색관찰결과.동시진행상규PCR대조시험. 결과 경지당응효전영,추화을정염색발현LAMP확증산물위대소불등적DNA편단,재확증산물중가입형광소SYBRⅡ안색유자홍색변성록색형광,이음성대조관잉보지자홍색.배개도동온DNA확증적민감성위103개궁형충/ml, 고우상규PCR. 결론 LAMP확증검측궁형충DNA적방법이경건립,위발전궁형충병쾌속진단방법전정료량호적기출.
