医学研究生学报
醫學研究生學報
의학연구생학보
JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATE
2010年
12期
1240-1243
,共4页
李祥勇%罗海清%林观平%周克元
李祥勇%囉海清%林觀平%週剋元
리상용%라해청%림관평%주극원
Bi-1%重组慢病毒载体%NIH3T3
Bi-1%重組慢病毒載體%NIH3T3
Bi-1%중조만병독재체%NIH3T3
目的 慢病毒载体技术已被广泛应用于基因功能分析、信号转导通路和基因治疗的研究.文中应用慢病毒系统构建凋亡抑制基因Bi-1的慢病毒表达载体并检测其在NIH3T3细胞中的表达,为后续的以Bi-1基因为靶点的肿瘤基因治疗研究奠定基础. 方法 根据慢病毒表达载体酶切位点的特征序列设计PCR扩增引物并扩增人Bi-1cDNA,并采用DNA重组技术定向克隆至pLCMV-IG质粒中,构建重组慢病毒载体质粒pLCMV-IG-Bi-1,经PCR、双酶切和测序鉴定后,包装慢病毒感染至小鼠成纤维细胞株NIH3T3中,RT-PCR及Western-blot 分别检测NIH3T3细胞中Bi-1基因和蛋白的表达. 结果 PCR、酶切及测序结果 表明重组慢病毒载体构建成功;NIH3T3细胞感染重组载体包装的慢病毒后出现明显的Bi-1基因高表达. 结论 成功构建靶向Bi-1基因的重组慢病毒载体,为进一步研究Bi-1基因对细胞生长转化的影响提供了实验依据.
目的 慢病毒載體技術已被廣汎應用于基因功能分析、信號轉導通路和基因治療的研究.文中應用慢病毒繫統構建凋亡抑製基因Bi-1的慢病毒錶達載體併檢測其在NIH3T3細胞中的錶達,為後續的以Bi-1基因為靶點的腫瘤基因治療研究奠定基礎. 方法 根據慢病毒錶達載體酶切位點的特徵序列設計PCR擴增引物併擴增人Bi-1cDNA,併採用DNA重組技術定嚮剋隆至pLCMV-IG質粒中,構建重組慢病毒載體質粒pLCMV-IG-Bi-1,經PCR、雙酶切和測序鑒定後,包裝慢病毒感染至小鼠成纖維細胞株NIH3T3中,RT-PCR及Western-blot 分彆檢測NIH3T3細胞中Bi-1基因和蛋白的錶達. 結果 PCR、酶切及測序結果 錶明重組慢病毒載體構建成功;NIH3T3細胞感染重組載體包裝的慢病毒後齣現明顯的Bi-1基因高錶達. 結論 成功構建靶嚮Bi-1基因的重組慢病毒載體,為進一步研究Bi-1基因對細胞生長轉化的影響提供瞭實驗依據.
목적 만병독재체기술이피엄범응용우기인공능분석、신호전도통로화기인치료적연구.문중응용만병독계통구건조망억제기인Bi-1적만병독표체재체병검측기재NIH3T3세포중적표체,위후속적이Bi-1기인위파점적종류기인치료연구전정기출. 방법 근거만병독표체재체매절위점적특정서렬설계PCR확증인물병확증인Bi-1cDNA,병채용DNA중조기술정향극륭지pLCMV-IG질립중,구건중조만병독재체질립pLCMV-IG-Bi-1,경PCR、쌍매절화측서감정후,포장만병독감염지소서성섬유세포주NIH3T3중,RT-PCR급Western-blot 분별검측NIH3T3세포중Bi-1기인화단백적표체. 결과 PCR、매절급측서결과 표명중조만병독재체구건성공;NIH3T3세포감염중조재체포장적만병독후출현명현적Bi-1기인고표체. 결론 성공구건파향Bi-1기인적중조만병독재체,위진일보연구Bi-1기인대세포생장전화적영향제공료실험의거.
