中华妇产科杂志
中華婦產科雜誌
중화부산과잡지
CHINESE JOUNAL OF OBSTETRICS AND GYNECOLOGY
2004年
1期
30-34
,共5页
桂黎明%魏丽惠%徐明旭%王建六%钟英成%李小平%屠铮%孙蓬明%马大龙
桂黎明%魏麗惠%徐明旭%王建六%鐘英成%李小平%屠錚%孫蓬明%馬大龍
계려명%위려혜%서명욱%왕건륙%종영성%리소평%도쟁%손봉명%마대룡
子宫内膜肿瘤%肿瘤细胞,培养的%受体,雌激素%转录,遗传%基因,ras
子宮內膜腫瘤%腫瘤細胞,培養的%受體,雌激素%轉錄,遺傳%基因,ras
자궁내막종류%종류세포,배양적%수체,자격소%전록,유전%기인,ras
目的探讨人子宫内膜癌细胞株HEC-1A细胞ras基因第12密码子中突变型(即[12Asp]K-ras4B基因)对雌激素受体(ER)及其亚型α、β蛋白的表达和转录活性的影响.方法 (1)用蛋白免疫印迹法检测[12Asp]K-ras4B基因对ERα、ERβ蛋白表达的影响.(2)构建含荧光素酶报告基因和ER反应元件(ERE)的真核表达质粒pGL3-ERE-luciferase,与表达绿色荧光蛋白的pEGFP-N1质粒共同转染鼠成纤维细胞株NIH3T3细胞及HEC-1A细胞,观察雌二醇调节[12Asp]K-ras4B基因对ER的转录活性;分别转染含有全长野生型ERα cDNA的pSV5-HER0和抑制raf基因的pCMV-rafS621A, 探讨[12Asp]K-ras4B/raf信号通路对ER转录活性的调节作用.结果 (1)NIH3T3细胞转染pcDI-[12Asp]K-ras4B质粒与转染空载体pcDI质粒比较,ERα表达水平增加3.6倍(分别为97±25和349±67,P<0.01),ERβ增加1.9倍(分别为128±37和249±30,P<0.05).(2)pCMV-rafS621A质粒分别转染到含pcDI-[12Asp]K-ras4B质粒的NIH3T3细胞和HEC-1A细胞,转染前、后NIH3T3细胞ERα蛋白表达水平分别为724±45和310±46(P<0.05),ERβ蛋白表达水平分别为493±20和284±20(P<0.01);转染前、后HEC-1A细胞ERα蛋白表达水平分别为566±22和279±30(P<0.01),ERβ蛋白表达水平分别为405±33和165±15(P<0.01).(3)与未加雌二醇的对照比较,雌二醇刺激含pcDI-[12Asp]K-ras4B质粒的NIH3T3细胞和HEC-1A细胞后,可使ER转录活性增强,分别增加13倍(分别为130±42和1681±242, P<0.01)和19倍(分别为141±39和2644±337,P<0.001).(4)转染pSV5-HER0到含pcDI-[12Asp]K-ras4B质粒的NIH3T3细胞和HEC-1A细胞后,与未转染细胞比较,细胞荧光素酶活性分别增加8倍(分别为1014±91和8099±452,P<0.01)和6倍(分别为2148±259和12 705±2670,P<0.001);转染pCMV-rafS621A质粒到含pcDI-[12Asp]K-ras4B质粒的NIH3T3细胞和HEC-1A细胞后,NIH3T3细胞转染前、后荧光素酶活性分别为1184±168和152±27(P<0.05),HEC-1A细胞分别为1949±212和304±60(P<0.01).结论 (1)[12Asp]K-ras4B/raf 信号通路调节HEC-1A细胞ERα和ERβ蛋白的表达;(2)在雌二醇的作用下,[12Asp]K-ras4B基因对HEC-1A细胞的ER转录活性有影响.
目的探討人子宮內膜癌細胞株HEC-1A細胞ras基因第12密碼子中突變型(即[12Asp]K-ras4B基因)對雌激素受體(ER)及其亞型α、β蛋白的錶達和轉錄活性的影響.方法 (1)用蛋白免疫印跡法檢測[12Asp]K-ras4B基因對ERα、ERβ蛋白錶達的影響.(2)構建含熒光素酶報告基因和ER反應元件(ERE)的真覈錶達質粒pGL3-ERE-luciferase,與錶達綠色熒光蛋白的pEGFP-N1質粒共同轉染鼠成纖維細胞株NIH3T3細胞及HEC-1A細胞,觀察雌二醇調節[12Asp]K-ras4B基因對ER的轉錄活性;分彆轉染含有全長野生型ERα cDNA的pSV5-HER0和抑製raf基因的pCMV-rafS621A, 探討[12Asp]K-ras4B/raf信號通路對ER轉錄活性的調節作用.結果 (1)NIH3T3細胞轉染pcDI-[12Asp]K-ras4B質粒與轉染空載體pcDI質粒比較,ERα錶達水平增加3.6倍(分彆為97±25和349±67,P<0.01),ERβ增加1.9倍(分彆為128±37和249±30,P<0.05).(2)pCMV-rafS621A質粒分彆轉染到含pcDI-[12Asp]K-ras4B質粒的NIH3T3細胞和HEC-1A細胞,轉染前、後NIH3T3細胞ERα蛋白錶達水平分彆為724±45和310±46(P<0.05),ERβ蛋白錶達水平分彆為493±20和284±20(P<0.01);轉染前、後HEC-1A細胞ERα蛋白錶達水平分彆為566±22和279±30(P<0.01),ERβ蛋白錶達水平分彆為405±33和165±15(P<0.01).(3)與未加雌二醇的對照比較,雌二醇刺激含pcDI-[12Asp]K-ras4B質粒的NIH3T3細胞和HEC-1A細胞後,可使ER轉錄活性增彊,分彆增加13倍(分彆為130±42和1681±242, P<0.01)和19倍(分彆為141±39和2644±337,P<0.001).(4)轉染pSV5-HER0到含pcDI-[12Asp]K-ras4B質粒的NIH3T3細胞和HEC-1A細胞後,與未轉染細胞比較,細胞熒光素酶活性分彆增加8倍(分彆為1014±91和8099±452,P<0.01)和6倍(分彆為2148±259和12 705±2670,P<0.001);轉染pCMV-rafS621A質粒到含pcDI-[12Asp]K-ras4B質粒的NIH3T3細胞和HEC-1A細胞後,NIH3T3細胞轉染前、後熒光素酶活性分彆為1184±168和152±27(P<0.05),HEC-1A細胞分彆為1949±212和304±60(P<0.01).結論 (1)[12Asp]K-ras4B/raf 信號通路調節HEC-1A細胞ERα和ERβ蛋白的錶達;(2)在雌二醇的作用下,[12Asp]K-ras4B基因對HEC-1A細胞的ER轉錄活性有影響.
목적탐토인자궁내막암세포주HEC-1A세포ras기인제12밀마자중돌변형(즉[12Asp]K-ras4B기인)대자격소수체(ER)급기아형α、β단백적표체화전록활성적영향.방법 (1)용단백면역인적법검측[12Asp]K-ras4B기인대ERα、ERβ단백표체적영향.(2)구건함형광소매보고기인화ER반응원건(ERE)적진핵표체질립pGL3-ERE-luciferase,여표체록색형광단백적pEGFP-N1질립공동전염서성섬유세포주NIH3T3세포급HEC-1A세포,관찰자이순조절[12Asp]K-ras4B기인대ER적전록활성;분별전염함유전장야생형ERα cDNA적pSV5-HER0화억제raf기인적pCMV-rafS621A, 탐토[12Asp]K-ras4B/raf신호통로대ER전록활성적조절작용.결과 (1)NIH3T3세포전염pcDI-[12Asp]K-ras4B질립여전염공재체pcDI질립비교,ERα표체수평증가3.6배(분별위97±25화349±67,P<0.01),ERβ증가1.9배(분별위128±37화249±30,P<0.05).(2)pCMV-rafS621A질립분별전염도함pcDI-[12Asp]K-ras4B질립적NIH3T3세포화HEC-1A세포,전염전、후NIH3T3세포ERα단백표체수평분별위724±45화310±46(P<0.05),ERβ단백표체수평분별위493±20화284±20(P<0.01);전염전、후HEC-1A세포ERα단백표체수평분별위566±22화279±30(P<0.01),ERβ단백표체수평분별위405±33화165±15(P<0.01).(3)여미가자이순적대조비교,자이순자격함pcDI-[12Asp]K-ras4B질립적NIH3T3세포화HEC-1A세포후,가사ER전록활성증강,분별증가13배(분별위130±42화1681±242, P<0.01)화19배(분별위141±39화2644±337,P<0.001).(4)전염pSV5-HER0도함pcDI-[12Asp]K-ras4B질립적NIH3T3세포화HEC-1A세포후,여미전염세포비교,세포형광소매활성분별증가8배(분별위1014±91화8099±452,P<0.01)화6배(분별위2148±259화12 705±2670,P<0.001);전염pCMV-rafS621A질립도함pcDI-[12Asp]K-ras4B질립적NIH3T3세포화HEC-1A세포후,NIH3T3세포전염전、후형광소매활성분별위1184±168화152±27(P<0.05),HEC-1A세포분별위1949±212화304±60(P<0.01).결론 (1)[12Asp]K-ras4B/raf 신호통로조절HEC-1A세포ERα화ERβ단백적표체;(2)재자이순적작용하,[12Asp]K-ras4B기인대HEC-1A세포적ER전록활성유영향.
