浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2005年
2期
110-115
,共6页
羊正纲%陈智%倪勤%徐宁%潘修成%金晗英%李星仪
羊正綱%陳智%倪勤%徐寧%潘脩成%金晗英%李星儀
양정강%진지%예근%서저%반수성%금함영%리성의
肝炎病毒,乙型%RNA/遗传学%RNA干扰%表面抗原%绿荧光蛋白
肝炎病毒,乙型%RNA/遺傳學%RNA榦擾%錶麵抗原%綠熒光蛋白
간염병독,을형%RNA/유전학%RNA간우%표면항원%록형광단백
目的:利用增强型绿荧光蛋白(EGFP)和小发夹RNA(shRNA)表达载体技术,建立一种行之有效且相对经济的验证siRNA的方法.方法:将HBV S基因融合到EGFP中,建立HBs-GFP融合基因表达载体;同时构建带U6+27 RNA转录启动子的shRNA表达载体pAVU6+4sh357.二载体共转染HepG2细胞后,流式细胞仪检测HBs-GFP蛋白的荧光强度;同时RT-PCR和实时定量PCR法检测HBs-GFP mRNA水平的改变.结果:小干扰RNA有效抑制目的基因的表达,共转染后第72 h荧光蛋白抑制率为55.4%;HBs-GFP 融合基因的RNA表达受到显著抑制,抑制率达到90%.结论:载体法表达的小干扰RNA体外显著抑制HBs-GFP融合基因的表达.
目的:利用增彊型綠熒光蛋白(EGFP)和小髮夾RNA(shRNA)錶達載體技術,建立一種行之有效且相對經濟的驗證siRNA的方法.方法:將HBV S基因融閤到EGFP中,建立HBs-GFP融閤基因錶達載體;同時構建帶U6+27 RNA轉錄啟動子的shRNA錶達載體pAVU6+4sh357.二載體共轉染HepG2細胞後,流式細胞儀檢測HBs-GFP蛋白的熒光彊度;同時RT-PCR和實時定量PCR法檢測HBs-GFP mRNA水平的改變.結果:小榦擾RNA有效抑製目的基因的錶達,共轉染後第72 h熒光蛋白抑製率為55.4%;HBs-GFP 融閤基因的RNA錶達受到顯著抑製,抑製率達到90%.結論:載體法錶達的小榦擾RNA體外顯著抑製HBs-GFP融閤基因的錶達.
목적:이용증강형록형광단백(EGFP)화소발협RNA(shRNA)표체재체기술,건립일충행지유효차상대경제적험증siRNA적방법.방법:장HBV S기인융합도EGFP중,건립HBs-GFP융합기인표체재체;동시구건대U6+27 RNA전록계동자적shRNA표체재체pAVU6+4sh357.이재체공전염HepG2세포후,류식세포의검측HBs-GFP단백적형광강도;동시RT-PCR화실시정량PCR법검측HBs-GFP mRNA수평적개변.결과:소간우RNA유효억제목적기인적표체,공전염후제72 h형광단백억제솔위55.4%;HBs-GFP 융합기인적RNA표체수도현저억제,억제솔체도90%.결론:재체법표체적소간우RNA체외현저억제HBs-GFP융합기인적표체.
