四川大学学报（自然科学版）
四川大學學報（自然科學版）
사천대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY（NATURAL SCIENCE EDITION）
2006年
2期
435-440
,共6页
简化的hPK-5%Kirngle环%基因重组%融和表达
簡化的hPK-5%Kirngle環%基因重組%融和錶達
간화적hPK-5%Kirngle배%기인중조%융화표체
从正常人肝脏组织中提取总RNA,合理设计引物,利用RT-PCR直接得到简化的hPK-5基因.将该基因克隆至原核表达质粒pGEX-1λT,将此重组载体转化大肠杆菌JM109,经PCR、酶切及测序鉴定阳性克隆.用IPTG诱导阳性克隆表达融和蛋白,SDS-PAGE观察表达产物.再通过Western-Blotting鉴定.简化的hPK-5基因的RT-PCR产物为264bp.通过酶切、测序等方法鉴定简化的hPK-5基因正确克隆至原核表达质粒pGEX-1λT中.重组质粒pGEX-1λT/predhPK-5在大肠杆菌中成功地表达出了GST/predhPK-5融合蛋白,并通过免疫学测定,相对分子质量约为3.6×104,与理论值3.58×104相符.目的蛋白表达量占菌体总蛋白的23.6%.
從正常人肝髒組織中提取總RNA,閤理設計引物,利用RT-PCR直接得到簡化的hPK-5基因.將該基因剋隆至原覈錶達質粒pGEX-1λT,將此重組載體轉化大腸桿菌JM109,經PCR、酶切及測序鑒定暘性剋隆.用IPTG誘導暘性剋隆錶達融和蛋白,SDS-PAGE觀察錶達產物.再通過Western-Blotting鑒定.簡化的hPK-5基因的RT-PCR產物為264bp.通過酶切、測序等方法鑒定簡化的hPK-5基因正確剋隆至原覈錶達質粒pGEX-1λT中.重組質粒pGEX-1λT/predhPK-5在大腸桿菌中成功地錶達齣瞭GST/predhPK-5融閤蛋白,併通過免疫學測定,相對分子質量約為3.6×104,與理論值3.58×104相符.目的蛋白錶達量佔菌體總蛋白的23.6%.
종정상인간장조직중제취총RNA,합리설계인물,이용RT-PCR직접득도간화적hPK-5기인.장해기인극륭지원핵표체질립pGEX-1λT,장차중조재체전화대장간균JM109,경PCR、매절급측서감정양성극륭.용IPTG유도양성극륭표체융화단백,SDS-PAGE관찰표체산물.재통과Western-Blotting감정.간화적hPK-5기인적RT-PCR산물위264bp.통과매절、측서등방법감정간화적hPK-5기인정학극륭지원핵표체질립pGEX-1λT중.중조질립pGEX-1λT/predhPK-5재대장간균중성공지표체출료GST/predhPK-5융합단백,병통과면역학측정,상대분자질량약위3.6×104,여이론치3.58×104상부.목적단백표체량점균체총단백적23.6%.
