江苏医药
江囌醫藥
강소의약
JIANGSU MEDICAL JOURNAL
2006年
6期
561-563
,共3页
明志君%肖淑宁%陈永井%施勤%张学光
明誌君%肖淑寧%陳永井%施勤%張學光
명지군%초숙저%진영정%시근%장학광
PD-1基因%逆转录病毒
PD-1基因%逆轉錄病毒
PD-1기인%역전록병독
目的克隆人PD-1基因,构建含有该目的基因的重组逆转录病毒载体,并转染入L929细胞,获得稳定高表达PD-1分子的L929细胞.方法用PCR法从pGEX-5X-3-PD-1扩增出PD-1基因,通过双酶切(PstI BamHI)装入逆转录病毒载体pGEZ Term中,脂质体法共转染包装细胞293T,用含有完整病毒颗粒的293T细胞的培养上清感染L929细胞,72 h后,加入Zeocin进行筛选,挑选出能稳定表达PD-1分子的L929细胞株.结果成功克隆了人PD-1基因,构建了含PD-1基因的重组逆转录病毒载体,包装出具有感染能力的重组PD-1逆转录病毒,筛选出具有稳定表达人PD-1分子的L929基因转染细胞.经流式细胞仪检测:PD-1分子在L929基因转染细胞中具有高表达,达到97.6%.结论构建了含人PD-1基因重组逆转录病毒的载体,筛选出稳定表达人PD-1分子的L929细胞株.
目的剋隆人PD-1基因,構建含有該目的基因的重組逆轉錄病毒載體,併轉染入L929細胞,穫得穩定高錶達PD-1分子的L929細胞.方法用PCR法從pGEX-5X-3-PD-1擴增齣PD-1基因,通過雙酶切(PstI BamHI)裝入逆轉錄病毒載體pGEZ Term中,脂質體法共轉染包裝細胞293T,用含有完整病毒顆粒的293T細胞的培養上清感染L929細胞,72 h後,加入Zeocin進行篩選,挑選齣能穩定錶達PD-1分子的L929細胞株.結果成功剋隆瞭人PD-1基因,構建瞭含PD-1基因的重組逆轉錄病毒載體,包裝齣具有感染能力的重組PD-1逆轉錄病毒,篩選齣具有穩定錶達人PD-1分子的L929基因轉染細胞.經流式細胞儀檢測:PD-1分子在L929基因轉染細胞中具有高錶達,達到97.6%.結論構建瞭含人PD-1基因重組逆轉錄病毒的載體,篩選齣穩定錶達人PD-1分子的L929細胞株.
목적극륭인PD-1기인,구건함유해목적기인적중조역전록병독재체,병전염입L929세포,획득은정고표체PD-1분자적L929세포.방법용PCR법종pGEX-5X-3-PD-1확증출PD-1기인,통과쌍매절(PstI BamHI)장입역전록병독재체pGEZ Term중,지질체법공전염포장세포293T,용함유완정병독과립적293T세포적배양상청감염L929세포,72 h후,가입Zeocin진행사선,도선출능은정표체PD-1분자적L929세포주.결과성공극륭료인PD-1기인,구건료함PD-1기인적중조역전록병독재체,포장출구유감염능력적중조PD-1역전록병독,사선출구유은정표체인PD-1분자적L929기인전염세포.경류식세포의검측:PD-1분자재L929기인전염세포중구유고표체,체도97.6%.결론구건료함인PD-1기인중조역전록병독적재체,사선출은정표체인PD-1분자적L929세포주.
